Для обезвоживания кусочков ткани при изготовлении гистопрепаратов используют

Обезвоживание фиксированных объектов обязательно предшествует их заливке в парафин и целлоидин. Из фиксированных объектов можно готовить срезы и без заливки при помощи замораживающего микротома (замораживающего столика) и вибратома.

Для обезвоживания материала обычно используют несколько порций этилового спирта восходящей крепости. Кроме этанола для обезвоживания может быть применен безводный ацетон (ЧДА), изопропанол, диоксан, глицерин.

Обезвоживание ускоряется при постоянном перемешивании жидкости, которое обеспечивают автоматизированные системы проводки.

Продолжительность пребывания объектов в спиртах обусловлена их размерами, свойствами тканей и особыми задачами исследования (например, необходимостью максимального удаления липоидов из нервной ткани при окраске по Нисслю, перед заливкой в целлоидин).

Перед обезвоживанием материала производят подготовку фиксированных кусочков органов и тканей для гистологического исследования (вырезку). Вырезанные кусочки должны иметь толщину не более 0,8 см (оптимально 0,4-0,5 см), длину и ширину в пределах 1,5-2,0 см, т.е. не превышать длину сторон стандартного покровного стекла.

Перед проводкой материала кусочки органов и тканей, которые были фиксированы в формалине, промывают в проточной воде (до 24 ч) и подсушивают на фильтровальной бумаге.

Обезвоживание материала, фиксированного в формалине, рекомендуется начинать с 70-80%-ного этанола, в котором объекты могут находиться длительное время без существенного сжатия и изменения тинкториальных свойств. Дальнейшая обработка может различаться в зависимости от размера вырезанных кусочков и возможности использования абсолютного спирта. Ускорения процесса обезвоживания можно добиться, вырезая кусочки тканей меньшего размера (например, 1 х 0,5 х 0,3 см), обеспечив постоянное перемешивание растворов (например, в автоматизированной системе гистологической проводки) и проводя обезвоживание при 37°С в термостате.

Для обезвоживания кусочков обычного размера (1-2 x 1-1,5 x 0,5-0,8 см) можно рекомендовать следующие схемы ручной проводки (при комнатной температуре без постоянного перемешивания).

1) Этап
Этанол 80 % 18-24 ч
Этанол 96 % (I) 18-24 ч
Этанол 96 % (II) 18-24 ч
Этанол абсолютный 6-24 ч

2) Этап
Этанол 80% 18-24 ч
Этанол 96% (I) 18-24 ч
Этанол 96% (II) 18-24 ч
Этанол 96% (III) 18-24 ч

3) Этап
Этанол 80% 18-24 ч
Этанол 96% (I) 18-24 ч
Этанол 96% (II) 18-24 ч
Метилсалицилат (или метилбензоат) — этанол 96% (1:1) 2 ч
Метилсалицилат (или метилбензоат) 12-24 ч
Большее повышение температуры растворов не рекомендуется в связи с опасностью сжатия и чрезмерного уплотнения тканей. Плотные объекты (кожа, декальцинированная кость) обезвоживать при повышенной температуре не следует.
В метилсалицилате материал можно оставить хранится длительное время без ухудшения качества препаратов. Так как проводка через метилсалицилат и метилбензоат приводит к смягчению плотных объектов, ее полезно использовать при обработке кусочков кожи и органов, содержащих много мышечной и соединительной ткани.

Для обезвоживания маленьких кусочков (размерами до 1 x 0,5 x 0,3 см) можно рекомендовать следующие схемы ручной проводки.

1) Этап
Этанол 80 % 6-8 ч
Этанол 96 % (I) 12-24 ч
Этанол 96 % (II) 4-24 ч
Этанол абсолютный 2-4 ч (при комнатной температуре)

2) Этап
Этанол 80% 6-8 ч
Этанол 96% (I) 12-24 ч
Этанол 96% (II) 6-24 ч
Этанол 96% (III) 3-5 ч (при комнатной температуре)

3) Этап
Этанол 80% 2-4 ч
Этанол 96% (I) 6-18 ч
Этанол 96% (II) 2-4 ч
Этанол 96% (III) 2-4 ч (при температуре 37°С).

Высокое качество обезвоживания может быть достигнуто только при использовании этанола, соответствующего указанной крепости. Поэтому качество поступающего в отделение спирта необходимо проверять с помощью ареометра. Объем обезвоживающего раствора должен не менее, чем в 10 раз превышать объем погруженных в него обезвоживаемых объектов.

ОБЕЗВОЖИВАНИЕ как метод

ОБЕЗВОЖИВАНИЕ как метод — способ удаления воды из различных материалов с целью получения обезвоженного продукта; широко применяется в гистологии, в медицинской, химико-фармацевтической, пищевой и других отраслях промышленности. О. производится с целью уменьшения веса (массы) материала, повышения его стабильности и создания условий для длительного хранения.

Читайте также: Столбчатая ткань мякоти листа имеет

О. проводится различными способами: 1) механическим способом — без изменения агрегатного состояния влаги; 2) с изменением агрегатного состояния влаги, т. е. путем перехода жидкости в пар (см. Выпаривание) или перехода льда в пар, минуя жидкую фазу (см. Лиофилизация).

При О. первым способом для удаления влаги используются центрифуги, различные типы прессов и фильтров. При О. вторым способом для фазового перехода жидкости или льда в пар к материалу необходимо подвести тепло. Второй способ О. широко используется при получении сухих мед. препаратов и лекарственных средств (антибиотиков, кровезаменителей, экстрактов лекарственных растений и др.). Для этого используются вакуумные сушильные шкафы, барабанные, ленточные, аэрофонтанные и распылительные сушилки. Лиофилизация применяется гл. обр. при получении белковых, ферментных и других мед. препаратов. Особенность обезвоживания мед. препаратов заключается в том, что многие из них в сухом виде должны быть стерильными, это определяет конструкцию сушильных аппаратов, применяемых в мед. промышленности. Распылительные сушилки применяются в тех случаях, когда О. подвергают термочувствительные препараты (кровезаменяющие жидкости, антибиотики, ферменты, р-ры сахаров и др.). Сущность процесса О. распылительным способом состоит в том, что исходный р-р с помощью быстро врашающихся дисков (18 000—24 000 об/мин) или форсунок диспергируется в объеме сушильной камеры и его капли, попадая в поток нагретого воздуха, мгновенно испаряются, т. к. между теплоносителем и объектом О. происходит интенсивный тепло- и массо-обмен. Путем подбора таких параметров О., как расход воздуха, расход р-ра, температура воздуха на входе и выходе из сушильной камеры, можно регулировать физ.-хим. свойства сухих препаратов, в т. ч. объемный вес (массу), размеры частиц, остаточную влажность и др. Дополнительное О. до постоянного веса (массы) позволяет определять остаточную влажность сухих препаратов, к-рая для многих мед. препаратов не должна превышать 1-2%.

Применение обезвоживания в гистологической практике

В гистологической практике О. применяют для удаления воды из кусочков органов и тканей в процессе приготовления гистол, препаратов и для обезвоживания реактивов, используемых в гистологических исследованиях (см. Гистологические методы исследования).

Кусочки органов и тканей перед заливкой в парафин или в целлоидин для их лучшего пропитывания обезвоживают с помощью эфира, ацетона, хлороформа или ксилола, однако чаще всего для этой цели используют этанол восходящих концентраций (от 50% до абсолютного Спирта). Зафиксированные кусочки органа или ткани промывают в проточной воде и последовательно помещают в сосуды с этанолом восходящих концентраций, выдерживая в каждом сосуде по нескольку часов. Этанол и другие органические растворители перед употреблением в свою очередь обезвоживают при помощи безводного (прокаленного до белого цвета) медного купороса или синтетического цеолита (алюмосиликата), к-рые «отбирают» воду от обрабатываемого жидкого реактива.

Применение обезвоживания для консервирования продуктов

О. широко применяется для консервирования пищевых продуктов. Преимуществом консервирования продуктов питания путем О. перед другими методами консервирования является уменьшение их объема и массы, что ведет к снижению экономических затрат на постройку складских помещений, упаковку и транспортировку.

Пищевые продукты, законсервированные методом О., сохраняются достаточно долгое время, не портясь, т. к. удаление из них влаги создает неблагоприятные условия для жизнедеятельности микроорганизмов и протекания ферментативных и неферментативных процессов.

Способ О. пищевых продуктов влияет на их органолептические свойства, внешний вид и способность к набуханию при оводнении. Высушенные методом лиофилизации ягоды, плоды, рыба, мясо в отличие от продуктов, высушенных методом тепловой сушки, хорошо сохраняют свои исходные качества — цвет, аромат, вкус, форму и размеры. В процессе оводнения продуктов питания, высушенных методом лиофильной сушки, почти полностью восстанавливается исходная влажность продукта, а при благоприятных условиях и клеточный тургор, особенно если во время замораживания продукта снижение температуры проводилось быстро и образовавшиеся мелкие кристаллики льда не нарушали структуру тканей (см. Пищевые продукты, лиофилизированные и сублимированные).

Читайте также: Сколько метров ткани нужно для женского костюма

Тепловая сушка, даже если она проводится при умеренных температурах (ок. 60°), приводит к резкому изменению структуры тканей, к их так наз. усадке и изменению формы продукта, влияет на их органолептические и вкусовые качества, а также на пищевую ценность. Для оводнения пищевых продуктов после тепловой сушки требуется их длительное замачивание или обработка при высоких температурах (варка).

Сушка продуктов питания при высоких температурах (выше 60°) приводит к изменению качества продукта вследствие плавления жира и клейстеризации крахмала. Степень денатурации белков при такой сушке выше, чем при сублимационной сушке (лиофилизации), хотя усвояемость азотистых веществ при питании продуктами, подвергшимися высокотемпературной сушке, мало зависит от способа О.

Различные способы О. пищевых продуктов по-разному сказываются на содержании в них витаминов. При сублимационной сушке во многих продуктах сохраняется до 80% аскорбиновой к-ты, тогда как при тепловой сушке в клубнике, напр., остается ок. 3%, а в малине до 1% исходного количества аскорбиновой к-ты.

Библиография: Бурич О. и Берки Ф. Сушка плодов и овощей, пер. с венгер., М., 1978; Волкова О. В. и Елецкий Ю. К. Основы гистологии и гистологической техники, с. 135, М., 1971; Генин С. А. Технология сушки картофеля, овощей и плодов, М., 1971; Гинзбург А. С. Основы теории и техники сушки пищевых продуктов, М., 1973; Гистология, под ред. В. Г. Елисеева и др., М., 1972; Голубев JI. Г., Caжин Б. С. и Валашек E. Р. Сушка в химико-фармацевтической промышленности, М., 1978, библиогр.; Л ы-ков А. В. Теория сушки, М.— Л., 1950, библиогр.; Малый практикум по цитологии, под ред. Ю. С. Ченцова, с. 257, М., 1977; Меркулов Г. А. Курс патологогистологической техники, с. 24 и др., Л., 1969; Подольский М. В. Высушивание препаратов крови и кровезаменителей, М., 1973, библиогр.; Соболева А. Д. Реакция клеток и тканей на обезвоживание, Новосибирск, 1975; Ткаченко Е. С. Питательная и биологическая ценность пищевых продуктов, консервированных методом сублимации, М., 19-66, библиогр.

М. В. Подольский; Л. С. Сутулов (гист.), Е. А. Лебедева (пит.).

Обезвоживание гистологического материала

библиографическое описание:
Обезвоживание гистологического материала — .

ОБЕЗВОЖИВАНИЕ МАТЕРИАЛА

После фиксации, для которой применялся формалин, кусочки промывают в течение 6,12 или 24 ч в проточной воде: на водопроводный кран надевают резиновую трубку, конец которой опускают в широкогорлую банку, закрытую марлей. Для промывки удобно использовать эксикаторы разных размеров, снабженные краном: в отверстие крышки эксикатора опускают шланг, по которому подают воду, а через кран эксикатора ее сливают.

В том случае, если в состав фиксатора входила пикриновая кислота, материал следует промыть в нескольких сменах 70% спирта, после фиксации с использованием сулемы -в йодированном 70% спирте. Материал, фиксированный для некоторых гистохимических реакций, электронно-микроскопического и иммуноцитохимического исследований, отмывают от фиксаторов в различных буферных смесях.

В случае необходимости кусочки тканей перед обезвоживанием можно уменьшить, подровнять. Если материал после фиксации не сразу подлежит проводке, то его можно оставить в 70-80% спирте.

СПОСОБЫ ОБЕЗВОЖИВАНИЯ ТКАНЕЙ

Перед заливкой материала в парафин пли целлоидин его необходимо обезводить. Существует несколько традиционных способов обезвоживания. Самым распространенным является обезвоживание в спиртах восходящей концентрации, начиная с 70 %. Обычно применяют батарею спиртов, состоящую из двух порций 96 % и двух — 100 % спирта. Продолжительность процесса обезвоживания в спиртах в среднем 48 ч в зависимости от качества материала (содержания жира в ткани) и размера кусочков, а также от их количества. При использовании автомата для заливки количество спиртов увеличивают, а при проведении кусочков по спиртовой батарее вручную их осторожно промокают фильтровальной бумагой или салфеткой из марли, что позволяет реже менять спирты в батарее.

Читайте также: Ткань не соответствует гост

Процесс обезвоживания можно ускорить, периодически встряхивая кусочки в банках со спиртами или поместив их в термостат при 37 °С. Спирты в батарее необходимо своевременно заменять. Контролировать пригодность спирта позволяет проба с водой. В отлитое из банки небольшое количество спирта добавляют 1 каплю воды. Помутнение раствора свидетельствует о необходимости замены спирта в батарее.

Абсолютный спирт можно приготовить из 96 %. Для этого применяют сульфат меди, ко-

торый помещают в ступку и прокаливают на спиртовке или в термостате, периодически растирая и размешивая до консистенции пыли и бледно-голубого цвета. Затем сульфат меди (1 часть) засыпают в банку с 96 % спиртом (4 или 6 частей), плотно закрывают ее крышкой, взбалтывают и оставляют на несколько дней, периодически встряхивая. Сульфат меди адсорбирует воду из спирта и вновь приобретает синюю окраску. Перед использованием абсолютного спирта проводят его контроль спиртометром или в пробирку с небольшим количеством ксилола (4—5 мл) добавляют каплю приготовленного спирта (раствор мутнеет, если спирт недостаточно обезвожен). Хорошим адсорбентом воды из спирта является также силикагель после предварительного просушивания его в термостате.

При отсутствии 100 % спирта в батарею включают еще одну порцию 96 % спирта. Однако в этом случае всегда есть опасность недостаточного обезвоживания и возникновения трудностей при получении срезов.

С целью ускорения обезвоживания применяют ацетон без примесей (ЧДА), предварительно добавив в него силикагель для удаления остатков воды или дистиллированный ацетон. Обезвоживание проводят в 2—3 сменах ацетона от нескольких часов до 1 суток в зависимости от величины объектов. Обезвоживание тканей возможно с помощью 99 % изопропилового спирта, который непосредственно смешивается с парафином без промежуточных растворителей (ксилол, хлороформ и др.). Таким же свойством обладает диоксан, однако в связи с высокой токсичностью он не нашел широкого применения в патогистологической технике

Для обезвоживания глицерином [Беккер Г.М., 1958; Wolf J., 1939, и др.] кусочки ткани последовательно помещают в 60 %, 80 % и 100 % глицерин на 3—4 ч, а затем в смесь, состоящую из равных частей 100 % глицерина и ксилола.

Выраженное влияние на скорость обезвоживания оказывает микроволновое излучение. Объекты в 70 % спирте помещают на 20 с в микроволновую печь (2,5 Гц/500 В), а затем дообезвоживают в абсолютном спирте в течение 30—60 мин.

Секционный и биопснйный материал часто обезвоживают в аппаратах типа АТ-5 и др. с последующим пропитыванием толуолом, хлороформом или их смесью с парафином. При этом применяют две порции 96 % спирта и две — 100 %. Общая продолжительность обезвоживания 48 ч. Преимущество использования аппаратов состоит в том, что в них материал постоянно перемешивается и находится во взвешенном состоянии. Однако аппарат не включается автоматически после внезапного перепада напряжения в электрической сети, что может привести к пересу-шиванию большого количества материала.