Бактерии постоянно подвергаются воздействию разного рода стрессов, которые могут быть следствием резких изменений, параметров окружающей среды. К их числу относится окислительный стресс. В обычных условиях уровень активных форм кислорода (АФК) способных повреждать практически все молекулярные компоненты клеток поддерживается на безопасном уровне благодаря активности антиоксидантных систем. В определенных условиях уровень оксидантов может превышать способность антиоксидантных систем к их детоксикации, следствием чего может быть снижение активности клеток, вплоть до полной гибели. Бактерии конституитивно синтезируют антиоксидантные ферменты, а также обладают механизмами адаптивного ответа, благодаря которым предварительное действие малых доз оксидантов вызывает повышенную устойчивость к последующему действию больших доз. [1]
Одним из главных внутриклеточных источников Н2О2 может быть дыхательная цепь, продуцирующая их, как побочные продукты в процессе аэробного метаболизма. Повышение концентрации активных форм кислорода до уровня, вызывающего окислительный стресс, происходит в результате нарушения нормального метаболизма при экстримальных воздействиях. [2 ]
Среда, окружающая живые микроорганизмы, характеризуется, как правило, окислительными условиями, а внутриклеточное состояние поддерживается в области восстановительных значений. Это очень важно для жизнедеятельности клеток, поскольку его нарушение может сопровождаться повышением уровня активных форм кислорода. Поддержание нормального редокс — состояния внутри клеток играет существенную роль в таких процессах, как синтез ДНК, экспрессия генов, ферментативная активность и другие. С другой стороны, изменения редокс — состояния внутриклеточного содержимого и отдельных молекул, являющиеся следствием стрессовых воздействий или результатом активности самих клеток, вовлечены в регуляцию клеточных процессов. [ 3 ]
Активные формы кислорода как средства, гибельные для инфекционных возбудителей, неспроста широко утилизируются в мире живого. У животных и человека фагоциты расправляются с инфекционными возбудителями с помощью АФК. У растений распространен гиперчувствительный ответ, при котором от АФК погибают не только патогены, но и клетки растений, инфицированные ими.
АФК могут образовываться в клетках как вторичные продукты аэробного метаболизма и генерироваться ферментными системами для уничтожения патогенных микроорганизмов, так и в результате воздействия на организм факторов окружающей среды, таких как ионизирующее и УФ — излучение, ксенобиотики, антибиотики и другие. В результате различных физических воздействий водные растворы становятся химически активной реакционной средой. Биологические объекты, в свою очередь, являются сенсорами тех процессов, которые происходят в окружающей их водной среде. По современным представлениям, АФК, образующиеся в клетках и межклеточной среде, играют двоякую роль. С одной стороны, они вызывают повреждение биологических структур, таких как ДНК, белки и липиды, в процессах окислительного стресса. С другой стороны, АФК, присутствующие в определенных физиологических концентрациях, выполняют важную сигнальную функцию, свидетельствуя о том, что данная водная среда пригодна для поддержания процессов жизнедеятельности осуществления редокс — регуляции различных клеточных функций. [4]
Из — за высокой реакционной способности Н2О2 может повреждать любые макромолекулы, однако в нормальных условиях наличие антиоксидантной защиты позволяет клеткам поддерживать внутриклеточную концентрацию оксидантов на безопасном уровне. При определенных условиях повышения скорости продукции АФК над скоростью их детоксикации может приводить к повреждению и гибели клеток, вызванных окислительным стрессом. В низких концентрациях АФК способны участвовать в регуляции различных клеточных функций у эукариот, таких как пролиферация, биосинтез гормонов, хемотаксис, апоптоз. Особую роль в регуляции клеточной активности играет Н2О2. Это связано с тем, что Н2О2 относительно стабильно генерируется клетками как побочный продукт метаболизма и легко проникает через биологические мембраны, что позволяет ей участвовать как во внутриклеточной, так и межклеточной сигнализации. Один из путей, по которым Н2О2, как и другие АФК, может участвовать в регуляции — это изменение внутриклеточного редокс — статуса за счет окисления молекул (например, глутатиона). Внутриклеточная концентрация Н2О2 выше 1 мкМ токсична для клеток, при ней неизбежно повреждение большого числа биомолекул и это существующее состояние окислительного стресса. Концентрации Н2О2, используемые клетками для регуляторных целей находятся в очень узком диапазоне (1-800 нМ).
Интересные данные получены Самуиловым В.Д и другими при воздействии перекиси на клетки цианобактерий. Медленнорастущие цианобактерии по своим характеристикам сходны с быстрорастущей E . coli . На клетки цианобактерий полумаксимальное ингибирующее действие на фотосинтезирующую способность Н2О2 оказывает уже при концентрации 0,75 мМ. В концентрации 14 мкМ Н2О2 ингибирует фиксацию СО2 .[5]
Наиболее полно механизм, с помощью которого клетки чувствуют уровень оксидантов и активируют системы антиоксидантной защиты, изучены из дрожжей и бактерий. У Sacharomyces cereviseae Н2О2 сенсор включает оксидантный рецептор и включается система регуляции, которая функционирует как ауторегулируемая система, способствующая поддержанию внутриклеточной концентрации Н2О2 на безопасном для клетки уровне. При обработке бактерий E . coli низкими концентраціями Н2О2 активируется экспрессия ряда генов, включенных в защиту клеток от перо — ксидного стресса ( активирующая концентрація in vitro – 0,05-0,2 мкМ).
Нами изучено влияние Н2О2 ,вне клеточного происхождения на клетки таких микроорганизмов: Proteus mirabilis , Staphylococcus aureus 209, Escherichia Coli .
Результаты показывают, что Н2О2 в концентрации 10 мМоль полностью подавляет рост клеток, в концентрации 1 мМоль — от 60 — 84 %, и 0,1 мМоль – от 20 — 50 %. Оптимальная продолжительность контакта Н2О2 с клетками во взвеси — 15 минут.
Полученные результаты еще раз подтверждают литературные данные о сильном бактерицидном эффекте перекиси водорода, который зависит от концентраций растворов Н2О2, времени контакта клеток с АФК, от концентрации клеток во взвеси.
1. Me льникова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К.,Бондарь И.А., Крутовых Н.Ф.,Труфакин В.А., 2006.В кн. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты.Слово.Москва 553стр.
2. Октябрьский О.Н.Смирнова Г.В., 2007г. Редокс — регуляция клеточных функций .Биохимия 2007.72вып. 2.- С. 158-174.
3.Штаркман И.Н.,Гудков С.В., Черников А.В., Брусков В.И., Влияние аминокислот на образование перекиси водорода и гидроксильных радикалов в воде и 8 — оксогуанина в ДНК при воздействии ренгеновского излучения. ж.Биохимия 2008, т73 вып. 4.- С.576 – 586.
4.Лущак В.И. Окислительный стресс и механизмы защиты от него у бактерий / В.И. Лущак // Биохимия. — 2001. — Т. 66, Вып. 5. — С. 592 — 609.
5. Самуилов В.Д., Безряднов Д.В., Гусев М.В., Киташов А.В., Федоренко Т.А., ж. Биохимия 2001г. т 66 вып. 6. — С. 790 -796. Н2О ингибирует фотосинтетический транспорт электронов в клетках цианобактерий.
Ферментативная тканей перекись водорода
Пероксид водорода H2O2 – бесцветная, прозрачная жидкость, является одним из важных побочных продуктов метаболизма и проявляет окислительно-восстановительный дуализм с преобладанием окислительных свойств. В чистом виде H2O2 термодинамически нестабилен, чем обусловлено его экзотермическое разложение с образованием воды и кислорода: 2H2O2 → 2H2O + O2↑; DH0 = –188,55 кДж. Разложение H2O2 ускоряется на свету, а также в присутствии ионов d-элементов с незавершенным d-подуровнем. Более устойчивы водные растворы пероксида водорода, способные сохраняться длительное время в прохладном темном месте.
Читайте также: Полость в органе при разрушение ткани
В митохондриях атомы водорода, отщепленные от субстрата дегидрогеназами, передают свои электроны через цепь переносчиков кислороду, который восстанавливается до воды: 4H++ O2 + 4e- → 2H2O. При этом физиологически важно, чтобы присоединив 4 электрона, молекула O2 восстанавливалась до двух молекул воды, поскольку при неполном восстановлении O2, например, при присоединении 2-х электронов образуется H2O2: 2H+ + O2 + 2e- → H2O2, а при присоединении 1 электрона – гипероксидный (надпероксидный) радикал: O2? + e-→ O2-. Известно, что пероксид водорода и гипероксидный радикал O2- токсичны для клеток, т.к. взаимодействуя с липидами клеточных мембран, повреждают их. Аэробные клетки при помощи фермента каталазы и медьсодержащего фермента супероксиддисмутазы (СОД) могут защитить себя от указанного вредного воздействия, превращая H2O2 и O2- в кислород, который участвует в последующих процессах биологического окисления.
2O2- + 2H+ 
2O- + 2H+ 
H2O2 + O2;
2H2O2 2H2O + O2.
В качестве фармакопейного препарата применяют 3 %-ный водный раствор пероксида водорода. В медицине препараты пероксида водорода используются наружно как бактерицидное и дезодорирующее средство для обработки ран, полосканий полости рта и горла.
Таким образом, пероксид водорода имеет важную медико-биологическую роль.
Научная электронная библиотека
Попков В. М., Чеснокова Н. П., Ледванов М. Ю.,
Глава 3. МОЛЕКУЛЯРНО-КЛЕТОЧНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ИНАКТИВАЦИИ СВОБОДНЫХ РАДИКАЛОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ СИСТЕМАХ Н.П. Чеснокова, Е.В. Понукалина, М.Н. Бизенкова, Г.А. Афанасьева
Как известно, одну из первых линий защиты клеток от агрессивного действия свободных радикалов обеспечивают ферменты – супероксиддисмутаза (СОД), каталаза, глутатионзависимые пероксидазы и трансферазы, удаляющие органические перекиси [42, 46, 64, 82]. Различаясь по строению активного центра и структуре полипептидной цепи, все СОД (металлоферменты) катализируют одну и ту же реакцию дисмутации:
При участии СОД обеспечивается инактивация активных форм кислорода, образуемых в ходе реакций переноса электронов в условиях нормы, а также при гипоксиях различного генеза, на фоне гипербарической оксигенации и других патогенных факторов [28, 30].
Судьба перекиси водорода, образуемой в процессе реакций дисмутации, различна.
Частично перекись водорода разлагается при участии каталазы, проявляющей активность почти во всех клетках организма человека, особенно в печени, почках, эритроцитах:
В печени, почках, нейтрофильных лейкоцитах обнаруживается пероксидазная активность, обеспечивающая инактивацию перекиси водорода в следующей реакции:
В нейтрофильных лейкоцитах имеется миелопероксидаза; в эритроцитах, печени, хрусталике глаза содержится глутатионпероксидаза, окисляющие соответственно галогены с образованием бактерицидных радикалов или восстановленный глутатион [67]. Миелопероксидаза фагоцитов катализирует реакцию образования гипохлорита с высокой бактерицидной активностью:
Н2О2 + Cl– > Н2О + ClO– (гипохлорит)
Гипохлорит разрушает стенку бактериальных клеток [79, 80].
В присутствии ионов двухвалентного железа перекись разлагается в реакции Фентона с образованием гидроксильного радикала (OH•):
Радикалы гидроксила чрезвычайно активны и разрушают различные по структуре молекулы [23, 24, 25, 42, 46].
Исключительно важным моментом эффективности ферментного звена антиоксидантной системы является сбалансированность активности СОД, каталазы и пероксидазы [28, 34]. Подавление активности одного из ферментов антиоксидантной системы может привести к избыточному накоплению активных форм кислорода и деструкции клеток.
Установлено, что накопление в среде перекиси водорода ведет к инактивации СОД. Полагают, что уровень активности внутриклеточных ферментативных антиоксидантных систем генетически детерминирован, причем избыточное накопление в клетках супероксидного анион-радикала или перекиси водорода сопровождается депрессией участков генома, ответственного за активность внутриклеточных ферментативных антиоксидантных систем [28, 35]. У человека ген, кодирующий синтез СОД, локализован в 21-й хромосоме. При сохраненной активности каталазы активность СОД не подавляется.
В нормальных условиях у человека содержание ферментных антиоксидантов не зависит от возраста, пола, массы тела. В то же время при различных патологических состояниях концентрация и активность ферментов антиоксидантной системы может изменяться в различных направлениях.
Как известно, главной дышащей органеллой клетки является митохондрия, содержащая большое количество активных ферментов и коферментов в дыхательной цепи и являющаяся потенциальным источником свободных радикалов при одноэлектронном восстановлении кислорода [106, 107, 108, 109]. В связи с этим митохондрии обладают последовательной системой защиты от активных форм кислорода, включающей следующие этапы:
1. Поглощение кислорода активной цитохромоксидазой, обеспечивающей четырехэлектронное восстановление кислорода с образованием воды.
2. Реокисление О2•– в кислород под действием окисленного цитохрома с, десорбированного с внутренней митохондриальной мембраны в межмембранное пространство.
3. Трансформацию О2•– под влиянием СОД митохондриального матрикса в перекись водорода с последующей утилизацией перекиси при участии глутатионпероксидазы и каталазы в матриксе митохондрий.
4. Удаление активных форм кислорода в матриксе при участии токоферола, КоQH2, аскорбита и других антиоксидантов [110, 113].
Важнейшим антиоксидантом митохондрий является коэнзим Q10, или убихинон (вездесущий хинон), содержащийся практически во всех тканях организма. Как известно, коэнзим Q10 является переносчиком электронов в дыхательной цепи, в то же время эффективно защищает липиды биологических мембран и липопротеиды крови от перекисного окисления, предохраняет ДНК и белки от окислительной модификации [47, 56].
Индукция активных форм кислорода возникает и в процессе окислительно-восстановительных, оксигеназных реакций в микросомах, обладающих и определенным механизмом защиты от свободных радикалов.
В настоящее время известно более 1000 ферментов класса оксигеназ и около 1200 генов, кодирующих их структуру [70]. Оксигеназы, как известно, разделяются на диоксигеназы, внедряющие 2 атома кислорода в молекулу субстрата, и монооксигеназы, катализирующие реакции с включением одного атома в субстрат, в то время как другой атом восстанавливается до воды. Наиболее многочисленными являются монооксигеназные реакции с участием цитохрома Р-450 [33, 70]. У человека суперсемейство цитохрома Р-450 представлено 57 функционально активными генами [136]. Монооксигеназные реакции играют важную роль не только в инактивации ксенобиотиков, но и в метаболизме витаминов, жирных кислот, нейротрансмиттеров, стероидных гормонов и др. соединений [33, 70]. В настоящее время очевидно, что образование активных форм кислорода происходит и в процессах микросомального окисления.
Установлено, что в качестве восстановителя в монооксигеназных реакциях участвует НАД•Н или НАДФ•Н. Предполагается, что образование активных форм кислорода возможно при участии «НАДФ•Н – цитохром Р-450 – редуктаза > цитохром в5», а также при распаде реакционных пероксокомплексов (Fe3+ – О2–) и гидропероксокомплексов (Fe3+ – НО2), (Fe2+ – НО2). Продукция активных метаболитов кислорода зависит от изоформы Р-450, рН среды, концентрации кислорода, наличия восстановителей и субстрата окислителя [30, 70].
В связи с постоянным образованием свободных радикалов микросомы обладают специализированными системами антиоксидантной защиты:
1) во-первых, активные формы кислорода (АФК) вызывают деградацию определенных изоформ цитохрома Р-450, инициирующего образование свободных радикалов;
2) во-вторых, АФК вызывают экспрессию генов, кодирующих ферменты антиоксидантной защиты клеток [34, 42, 69, 70].
Касаясь особенностей функционирования ферментного звена антиоксидантной системы, следует отметить, что реакции дисмутации супероксид анион – радикала и разложения перекиси водорода экзотермичны, а катализирующие эти реакции СОД и каталаза не нуждаются в кофакторах, что делает их активность не зависящей от функционирования других клеточных структур. СОД ускоряет спонтанную реакцию в 200 раз.
Читайте также: Ткань для штор в гатчине
Обнаружено несколько изоэнзимных форм СОД, отличающихся строением активного центра. У эукариотов Cu-, Zn-содержащая СОД локализуется в основном в цитозоле эритроцитов, в межмембранном пространстве митохондрий, в цитоплазме и ядре нервных клеток. Фермент чувствителен к цианиду, представляет собой металлопротеид с ММ 32000–33000 Д, состоит из двух субъединиц, каждая из которых связывает 1 атом Cu и 1 атом Zn [35, 91].
Mn-СОД локализована в митохондриях печени и миокарда эукариот, вблизи анионных каналов. Для микроорганизмов характерны железосодержащий и марганецсодержащий изоферменты. Mn-СОД состоит из 4 субъединиц с ММ 20 000 каждая, механизм действия энзима, вероятно, подобен действию Cu-, Zn-СОД-фермента, то есть металл в активном центре попеременно меняет свою валентность: Mn3+, Mn2+ [11, 35,64, 67, 73].
Супероксиддисмутазную активность могут проявлять комплексы меди с аминокислотами и пептидами, а также многие медьсодержащие белки.
Описанные выше изоферментные формы СОД являются внутриклеточными ферментами, в межклеточной жидкости (плазма крови, лимфа, синовиальная жидкость) они разрушаются в течение 5–10 минут. В то же время обнаружена экстрацеллюлярная высокомолекулярная форма СОД (ММ 120 000 Д), хорошо связывающаяся гепаринсульфатом гликокаликса эндотелиоцитов, локально защищающая их от свободных радикалов. Экстрацеллюлярная СОД не связывается с лейкоцитами и эритроцитами, не участвует в регуляции продукции активных форм кислорода гранулоцитами в процессе киллинга [37]. Экстрацеллюлярная СОД локально защищает эндотелиоциты от повреждения активными радикалами кислорода [79, 80].
СОД существенно ускоряет дисмутации супероксид анион-радикала. Однако, несмотря на высокую специфичность фермента, при определенных условиях Cu-СОД может взаимодействовать с перекисью водорода и выступать в качестве прооксиданта.
В последние годы были синтезированы модифицированные препараты СОД и каталазы, ассоциированные с иммуноглобулинами, сывороточным альбумином, высокомолекулярными спиртами, в частности, полиэтиленгликолями, что обеспечивало стабильность ферментов и длительность их циркуляции в крови [72]. Подобные ассоциированные формы фермента нашли применение в эксперименте при эндотоксикозе, инфаркте миокарда, региональной ишемии, ожогах кожи, а также при стрессовых и воспалительных повреждениях тканей [10, 45, 49, 50, 64, 67, 72].
Церулоплазмин, или голубая феррооксидаза, – гликопротеид сыворотки крови, образующийся в печени, катализирует реакцию:
способствует окислению полиаминов, полифенолов, аскорбиновой кислоты, возможно, участвует в транспорте меди. Прямая антиоксидантная функция определяется супероксиддисмутазной и ферриоксидазной активностью, а непрямые антиоксидантные свойства связаны с окислением Fe2+ и аскорбината, потенциальных источников супероксидного анион-радикала. Это основной реактант острой фазы воспаления [46].
Как указывалось, в процессе дисмутации супероксидного анион-радикала образуется перекись водорода, восстанавливаемая до воды в основном каталазой и глутатионпероксидазой [35, 64, 73].
Каталаза – хромопротеид с ММ около 240 000 Д, состоит из 4 субъединиц, имеющих по одной группе гема, локализуется в основном в пероксисомах, частично – в микросомах и в меньшей мере – в цитозоле. Полагают, что каталаза не имеет высокого сродства к перекиси водорода и не может эффективно обезвреживать это соединение при низких концентрациях, имеющихся в цитозоле. В пероксисомах, где концентрация перекиси водорода высока, каталаза активно разрушает ее.
Разложение перекиси водорода каталазой осуществляется в два этапа:
Fe3+-каталаза + 2 H2O2 > окисленная каталаза + H2O2 > Fe3+-каталаза + H2O2 + O2
При этом в окисленном состоянии каталаза работает как пероксидаза. Субстратами в пероксидазной реакции могут быть этанол, метанол, формиат, формальдегид и другие доноры водорода [35, 64, 73].
Следует отметить, что около 0,5 % кислорода, образующегося в результате разложения перекиси водорода, возникает в возбужденном, синглетном состоянии и таким образом в процессе разложения перекиси водорода вновь генерируются активные формы кислорода.
Активности каталазы и СОД коррелируют между собой, что может быть связано с переключением потока электронов с одной цепи транспорта на другую. В этих условиях СОД и каталаза действуют как звенья одной системы утилизации кислорода, размещенные в разных участках клетки.
Максимальная концентрация каталазы обнаружена в эритроцитах [35, 64, 73, 79, 80].
Важнейшей системой инактивации свободных радикалов являются восстановленный глутатион и комплекс ферментов – глутатионпероксидазы, глутатионтрансферазы и глутатионредуктазы.
Глутатион синтезируется в печени, откуда транспортируется в различные органы и ткани, обеспечивает восстановление дисульфидных групп белков, дигидроаскорбиновой кислоты, с участием глутатионтрансферазы образует конъюгаты в печени с электрофильными соединениями и последующим выведением их с мочой [27, 151].
Инактивация перекиси водорода в клетках обеспечивается также глутатионпероксидазой (ГПО), последняя является Se-содержащим ферментом, около 70 % ее локализовано в цитоплазме и около 30 % – в митохондриях всех клеток млекопитающих [51]. Глутатионпероксидаза – белок с ММ 84 000–88 000 Д, состоит из 4 идентичных субъединиц, каждая из которых включает 1 атом Se.
Глутатионпероксидаза катализирует реакцию восстановления гидроперекиси с помощью глутатиона, обладает широкой субстратной специфичностью по отношению к гидроперекисям, но абсолютно специфична к глутатиону [82].
Сродство глутатионпероксидазы и перекиси водорода выше, чем у каталазы, поэтому первая более эффективно работает при низких концентрациях субстрата, в то же время в защите клеток от окислительного стресса, вызванного высокими концентрациями перекиси водорода, ключевая роль принадлежит каталазе. Последнее особенно четко продемонстрировано на эндотелиальных клетках.
В клетках млекопитающих, кроме Se-зависимой ГПО, выявлена ГПО без Se с ММ39 000–46 000 Д, катализирующая восстановление гидроперекисей органических соединений, в том числе и полиненасыщенных жирных кислот, но ее эффективность в отношении перекиси водорода чрезвычайно низка.
Стресс через ?-адренергические рецепторы, цАМФ и протеинкиназу стимулирует активность ГПО [51].
Бесселеновая глутатионпероксидаза локализована в митохондриальных мембранах печени, почек, сердца, в то время как селеновая – в эритроцитах.
ГПО принадлежит активная роль в защите лизосомальных мембран от перекисного окисления [122, 140].
ГПО элиминирует перекиси стеринов и нуклеиновых кислот, является адаптивным ферментом, активность которого регулируется продуктами липопероксидации и активными формами кислорода. Важным компонентом антиоксидантной системы является глутатионтрансфераза, ингибирующая инициацию ПОЛ и обезвреживающая токсические метаболиты ПОЛ. Фермент активируется через цАМФ. Тканевая ГПО, по мнению ряда авторов, представляет собой изоформу глутатионтрансферазы [34, 51].
В клетках млекопитающих выделяют семейство мультифункциональных белков – глутатионтрансфераз, использующих глутатион для конъюгации с гидрофобными соединениями и восстановления органических перекисей. Эти ферменты локализованы в основном в цитозоле клеток. Основная функция глутатионтрансфераз в печени – защита клеток от ксенобиотиков и продуктов ПОЛ посредством их восстановления при участии глутатиона [67].
Класс низкомолекулярных антиоксидантов включает разнообразные соединения, отличающиеся по структуре и источникам их образования. К ним относятся глутатион, аскорбиновая кислота, мочевина, мочевая кислота, низкомолекулярные антиоксиданты липидной фазы [24, 25, 31, 111, 151].
Важную роль в инактивации свободных радикалов отводят внутриклеточным и внеклеточным ловушкам, обеспечивающим обрыв цепи свободнорадикального окисления [118, 119, 147].
Эффективными «перехватчиками» радикалов являются фенольные антиоксиданты, в частности, простые фенолы, нафтолы и оксипроизводные других ароматических соединений. В настоящее время выделено несколько тысяч фенольных соединений, среди которых выраженным антиоксидантным эффектом обладают витамины Е и К, убихиноны, триптофан и фенилаланин, а также большинство растительных и животных пигментов, в частности, каротиноиды, флавоноиды, фенокарбоксильные кислоты [137, 141, 142, 146, 149].
Читайте также: Ткань расходится по швам
Фенольные антиоксиданты (ликопен, каротины, билирубин и ?-токоферол) служат ингибиторами супероксидного анион-радикала, синглетного кислорода, гидроксильного радикала [69, 70].
Значение неферментных низкомолекулярных антиоксидантов трудно переоценить, особенно в условиях окислительного стресса, когда возникает быстрое истощение конститутивного пула ферментов свободными радикалами и необходимо значительное время для их синтеза de novo [33, 42, 49].
Большое биологическое значение для человека имеет антиоксидант – ?-токоферол. он жирорастворим, его основная локализация – гидрофобный слой биологических мембран; инактивирует главным образом радикалы жирных кислот.
Около 50 % клеточного токоферола локализовано в ядре, 30 % – в мембранах митохондрий, 20 % – в микросомальной мембране.
Недостаток витамина Е способствует деструкции мембран и экскреции креатина с мочой. Витамин Е – мощный антимутаген, в физиологических концентрациях является регулятором тканевого дыхания, а антиоксидантные свойства его проявляются при 10–15-кратном повышении этих доз [119]. Кроме ?-токоферола, в клетках содержатся водорастворимые антиоксиданты, в том числе аскорбат, которые реагируют с более широким спектром свободных радикалов и поддерживают содержание токоферола.
Аскорбиновая кислота может выступать в качестве донора и акцептора ионов водорода благодаря наличию в структуре двух фенольных групп, ее антиоксидантные свойства характеризуются широким спектром инактивирующего действия на различные свободные радикалы. Аскорбиновая кислота превосходит другие антиоксиданты плазмы крови в защите липидов от перекисного окисления [113].
Обращает на себя внимание тот факт, что в присутствии ионов Fe или Cu аскорбиновая кислота становится мощным прооксидантом.
Антиоксидантные свойства аскорбиновой кислоты связаны с ее оксиредуктазными переходами. Теряя атом водорода, аскорбиновая кислота превращается в радикал –
монодегидроаскорбиновую кислоту, проявляющую прооксидантный эффект, потеря еще одного атома водорода приводит к образованию дегидроаскорбиновой кислоты. При этом участвует фермент, содержащий медь – аскорбатоксидаза [150, 151].
Известно, что аскорбиновая кислота восстанавливает продукт окисления токоферола – ?-токофероксид в ?-токоферол. Витамины P и C также восстанавливаются. Аскорбиновая кислота более стабильна в присутствии метилметионина, обеспечивающего не только восстановление дегидроаскорбиновой кислоты, но и полноценность функционирования глутатионового звена антиоксидантной системы. Аскорбат играет важную роль среди водорастворимых антиоксидантов в защите липопротеидов крови [35, 64, 73].
Важная роль в антиоксидантной защите организма отводится SH-содержащим соединениями, к числу которых относятся, помимо трипептида – глутатиона, цистеин, цистин и метионин.
SH-соединениям отводится ведущая роль в защите клеток от радикала OH•. В связи с коротким периодом жизни и радиусом диффузии OH• в биологических системах указанное соединение не подвергается ферментативной инактивации и в то же время может оказать сильное цитотоксическое и мутагенное действие, которое определяет значимость SH-содержащих соединений – активных перехватчиков OH•-радикалов.
При различных стрессовых воздействиях, под влиянием эффектов токсических и ферментативных факторов патогенности различных инфекционных возбудителей, в частности, чумы, анаэробной газовой инфекции, стрептостафилококковой инфекции, наблюдается обратимая окислительная модификация SH-групп, приводящая к увеличению дисульфидных групп, что является типовой неспецифической реакцией организма на действие экстремального раздражителя [123].
Однако изменение соотношения восстановленных и окисленных тиогрупп в сторону преобладания последних изменяет состояние проницаемости клеточных мембран, их адгезивные свойства, приводит к резкому угнетению функции серосодержащих ферментов или коферментов (липоевой кислоты, коэнзима А, глутатиона), нарушению работы тиоловых металлопротеидов (цитохром P-450), ряда гормональных рецепторов и факторов транскрипции [136].
Антиоксидантные свойства глутатиона определяются как непосредственным взаимодействием с АФК и обменными реакциями с дисульфидными связями, так и функционированием ряда ферментов глутатионового цикла, из которых главные – глутатионпероксидаза и глутатион – S-трансфераза [151]. Глутатион играет важную роль в антиоксидантной защите не только при гипоксических, но и гипероксических состояниях, ограничивающих свободнорадикальное окисление. Глутатион обеспечивает формирование антиоксидантного потенциала в эритроцитах, кроветворных клетках, поддерживает пул восстановительного аскорбата [150, 151].
Из биофлавоноидов наиболее изучены антиоксидантные свойства кверцитина и рутина, способных за счет ортогидроксилов фенольного кольца С быть донорами водорода. Биофлавоноиды гасят супероксидный анион-радикал, проявляют антиатерогенное, гипохолестеринемическое действие.
К низкомолекулярным антиоксидантам относятся мочевина и мочевая кислота. Как известно, образование мочевины осуществляется в орнитиновом цикле из аммиака, хотя источником мочевины могут быть гуанидиновые соединения. В эритроцитах мочевина связывается с гемоглобином, в сыворотке крови – с альбумином; она легко проникает через гистогематический барьер. Антиоксидантный эффект мочевины связан со стабилизацией мембран и модификацией ферментов и тем самым сокращением числа железосодержащих центров перекисного окисления липидов [31].
Окислительно-восстановительные реакции мочевой кислоты тесно связаны с аскорбиновой кислотой. Мочевая кислота, как и аскорбат, способна вступать в обменные реакции с АФК, ингибировать ПОЛ, оказывать выраженный протективный эффект по отношению к Fe- и рН – индуцированному окислению аскорбата в сыворотке крови [27].
Резюмируя вышеизложенное в целом, что в целостном макроорганизме находятся в динамическом равновесии системы генерации свободных радикалов, в частности, свободных форм кислорода, и антирадикальной, антиоксидантной защиты.
Нарушение этого взаимодействия нередко приводит к дестабилизации биологических мембран, активации процессов липопероксидации, расстройствам гемостаза, фибринолиза, активации калликреинкининовой системы, системы комплемента, нарушению васкуляризации, оксигенации и трофики тканей, потенцированию специфических цитопатогенных эффектов воздействия бактериальных токсинов. В то же время известно, что антиоксиданты блокируют активацию протоонкогенов, нормализуют иммунный статус [46, 122].
Ослабление антиоксидантной защиты клеток может быть вызвано недостаточным поступлением в организм неферментных антиоксидантов, в частности, ?-токоферола. Недостаточное поступление в организм селена может быть одной из причин нарушения активности селензависимой глутатионпероксидазы. Дефицит Cu2+ и Zn2+ резко снижает активность СОД и повышает чувствительность к оксидантному повреждению.
Следует отметить, что изменения активности антиоксидантных ферментов зависят от интенсивности образования активных форм кислорода (АФК): в случае умеренного возрастания АФК возникает, как правило, активация ферментного звена антиоксидантной системы, при чрезмерном возрастании уровня свободных радикалов нередко происходит подавление ферментативного звена радикальной защиты клеток [46, 49].
Как известно, в условиях окислительного стресса, развивающегося при гипоксии, ишемии, гипероксии, действии стрессовых раздражителей патогенных факторов бактериальной природы – эндо-, экзотоксинов, ферментов и токсинов бактерий, ферментативная защита оказывает менее эффективное влияние по сравнению с протекторным действием низкомолекулярных антиоксидантов [42, 123].
Последнее обусловлено быстрой инактивацией конститутивного пула ферментов антиоксидантной системы свободными радикалами и значительным временем, необходимым для индукции их синтеза. В связи с этим повышается значимость низкомолекулярных антиоксидантов, что обусловлено их избыточным содержанием в клетках и биологических жидкостях, а также достаточно высокой миграционной способностью.
Однако при чрезмерном образовании инициаторов свободнорадикального окисления может истощиться пул и неферментных антиоксидантов, которые, выполнив роль ловушки свободных радикалов, превращаются в неактивные димерные и другие формы.
- Свежие записи
- Балкон в многоквартирном доме: является ли он общедомовым имуществом?
- Штраф за остекление балкона в 2022: что это и как избежать наказания
- Штраф за мусор с балкона: сколько заплатить за выбрасывание окурков
- Оформление балконного окна: выбираем шторы из органзы
- Как выбрать идеальные шторы для маленькой кухни с балконом