Теоретически разрешение просвечивающего электронного микроскопа составляет 0,002 нм; реальное разрешение современных электронных микроскопов приближается к 0,1 нм. На практике разрешение дли биологических объектов достигает 2 нм.
Просвечивающий электронный микроскоп (рис. 11-7) состоит из колонны, через которую в вакууме проходят электроны, излучаемые катодной нитью. Пучок электронов, фокусируемый кольцевыми магнитами, проходит через подготовленный образец. Характер рассеивания электронов зависит от плотности образца. Проходящие через образец электроны наблюдают на флюоресцирующем экране и регистрируют при помогли фотопластинки.
Сканирующий электронный микроскоп применяют для получения трёхмерного изображения поверхности исследуемого объекта.
Рис. 11-7. Схема электронного микроскопа
Подготовка материала к микроскопии
В бактериологической практике микроскопически исследуют неокрашенные образцы (нативный материал) и окрашенные препараты (мазки или мазки-отпечатки), приготовленные из клинического материала или колоний выросших микроорганизмов.
Нативные препараты
Подобные приёмы часто используют для диагностики сифилиса и предварительной диагностики диарей, вызванных кампилобактерами, а также для определения подвижности микроорганизмов.
Нативная ткань в медицине
В настоящее время среди методов клеточной биологии широко используются так называемые переживающие срезы нативной ткани («slаces», толщина слайсов – 200–400 мкм). Особенно много работ на слайсах проводится в различных исследованиях центральной нервной системы [1,9 и др.]. Однако метод переживающих срезов можно использовать в различных областях экспериментальной клеточной биологии: сочетание с электронной микроскопией, длительным культивированием эксплантатов ткани, в интравитальной микроскопии in vitro и др.
Невзирая на то, что ряд фирм выпускает коммерческие приборы для получения слайсов (резаки, вибратомы), продолжаются поиски новых технических решений приборов для микротомирования нативной ткани.
В данной статье рассматривается конструкция оригинального резака нативной ткани, на основе модификации стандартного ротационного микротома.
Описание конструкции микротома-резака
1. Базовая конструкция модифицированного ротационного микротома
В основе устройств использована стандартная схема ротационного микротома для получения гистологических срезов из фиксированной ткани (рис. 1).
Микротомный узел закреплен на общем основании (1). на вертикальной станине (2) каретка (3), совершает вертикальное поступательно-возвратное движение при помощи кривошипо-шатунного механизма (на схеме не показан). на каретке закреплена пластинка (4) с направляющими типа «ласточкин хвост». Вдоль пластинки (4) двигается призма (5). В стандартном ротационном микротоме на переднем конце призмы закреплен блок ткани, который двигается на определенное расстояние вперед и при движении каретки (3) вниз ткань режется ножом микротома, закрепленном на основании микротома (1). на другом конце призмы имеется гайка (7), в которой двигается специальный правозаходный микровинт (8). на заднем конце оси микровинта имеется шаровая опора (9) и храповое колесо (10). При движении храпового колеса по часовой стрелке, при каждом цикле вертикального движения каретки (3) микровинт продвигает вперед призму (5) на расстояние определяемое шагом микровинта и величиной поворота храпового колеса. Обычно толщина срезов, получаемых на ротационном микротоме, находится в диапазоне (0,5)1 – (15)20 мкм.
Рис. 1. Схема базовой конструкции резака. Объяснения в тексте
2. Модификация ротационного микротома для резки нативной ткани
а) Вместо ручного привода движения каретки (3) разработан специальный электропривод (на рис. 1 не показан), обеспечивающий работу кривошипо-шатунного механизма, приводящего в движение каретку (3). Дистанционное управление электроприводом (ножная педаль) освобождает руки экспериментатора для манипуляции со срезами нативной ткани.
б) Устанавливается микровинт (8) с левосторонней пятизаходной резьбой с шагом 5 мм. Храповое колесо с 200-ю зубцами позволяет осуществлять передвижение призмы назад от оператора на расстояние 25 мкм/на зуб колеса.
в) На основании микротома укрепляется кювета, в которой в специальный держатель в виде ванночки из желатины (агара) (рис. 2а) помещается нативная ткань.
Дно кюветы (1) имеет паз (2) глубиной 1 мм и шириной 15 мм. по бокам паза закреплены две пластинки (3) из нержавеющей стали толщиной 0.2 мм. Внутрь паза помещается желатиновый держатель ткани в виде ванночки (4). Держатель ткани помещается у передней стенки кюветы, а затем плавным движением вдвигается в паз. Желатиновая ванночка-держатель ткани прочно удерживается в пазе кюветы пластинками (3). В центральный канал желатиновой ванночки помещается образец ткани (5). Кювета (1) закрепляется на основании микротома-резака (6).
Читайте также: Воспалительно дистрофические изменения в тканях пародонта при
г) В переднюю часть призмы (5) вставляется держатель режущего инструмента (6 на рис. 1; рис. 2а, в). Держатель представляет рамку, в которой натянута половинка лезвия безопасной бритвы (режущий инструмент). Вид сверху (рис. 2в) показывает, что рамка держателя имеет хвостовик (14) для вставки в призму и винт (13), при помощи которой фиксируется угол положения рамки относительно образца нативной ткани.На рис. 2а показано крайнее нижнее положение режущего инструмента. Видно, что режущая кромка лезвия бритвы (7) не касается поверхности кюветы. В начале работы призма с держателем режущего инструмента перемещается в крайнее переднее положение ручкой храпового колеса. При резке режущий инструмент уходит назад от оператора, а срез ткани остается на передней стенке лезвия бритвы.
Для приготовления желатиновых ванночек используется специальное приспособление (рис.2б), состоящее из двух деталей: основания (8) и крышки (9). Крышка имеет выступы (10), размеры которых определяют ширину агаровых ванночек. Основание устройства имеет перегородки (11), определяющие размер канала в желатиновой ванночке (12). В пространство между основанием и крышкой заливается нагретый 6-8 % раствор желатины. После охлаждения желатины устройство разбирается, ванночки вынимаются и хранятся до использования в холодильнике в закрытой влажной камере (чашка Петри). В зависимости от размера образца ткани, определяется размер перегородок в основании описанного устройства. Например, для приготовления переживающих срезов хвостатого ядра мозга крысы (nuc. caudatus), мы использовали желатиновый ванночки с размером канала 4 х 4 мм.
Рис. 2. Схема кюветы, блока режущего инструмента и устройства для приготовления агаровых ванночек. Объяснение в тексте
Обсуждение. Для приготовления срезов нативной ткани в разное время было предложен ряд устройств для ручного и механизированного приготовления слайсов [2, 3, 6-8 и др.].
В описанной конструкции резака на основе модификации стандартного ротационного микротома удачно решено надежное закрепление образца нативной ткани относительно режущего инструмента. Применение агаровых ванночек, предложенное в данной работе, имеет явные преимущества перед описанными в литературе способами (закрепление образцов ткани на фильтровальной бумаге при помощи агара, желатины или полимерных (акриловых) клеев).
Описанный резак позволяет надежно готовить из нативной ткани слайсы толщиной 200-400 мкм. Известно, что именно этот диапазон толщин позволяет проводить изучение электрической активности нейронов в слайсах (in vitro).
Использование электропривода с дистанционным управлением позволяет быстро готовить небольшие серии слайсов из различных тканей.
Особенно удачно описанный резак был использован при получении слайсов из разных отделов головного мозга лабораторных животных для проведения электрофизиологических исследований (см., например, [4, 5, 10 и др.].
Работа поддержана грантом РФФИ, проект 14-00-295.
Особенности компьютерной томографии с контрастным усилением
КТ с контрастированием – исследование, предполагающее использование рентгеновского излучения в минимальных дозах, а также сопровождающееся введением специального вещества для усиления контрастности здоровых и патологически измененных тканей.
КТ с контрастом назначается далеко не в каждом случае использования методики компьютерной томографии. Этот способ обследования является очень точным, позволяя рассмотреть даже мельчайшие опухоли, тромбы и гематомы и применяется при необходимости детализации картины заболевания.
Вводя контрастный препарат внутривенно, мы отвечаем сразу на несколько вопросов: есть ли гипо- или гиперваскулярные опухоли в интересующей нас зоне и каковы ее размеры,
есть ли в ней некроз или кровоизлияние,
нет ли тромбозов , аневризм, инвазий сосудов,
нет ли нарушения целостности сосудистой стенки, нет транзиторных нарушений перфузии исследуемого органа.
Читайте также: Ткань лен народный лен
КТ с контрастом выполняется в случаях, когда нужно очень четко разделять нормальные и аномальные структуры в человеческом организме. Такая дифференцировка достигается посредством усиления сигнала от больных тканей. Эффект контрастирования при КТ основывается на том, что большинство опухолей, особенно, злокачественных, кровоснабжается лучше, чем здоровые ткани. Поэтому контрастное вещество будет накапливаться в них, давая картину отличия от прочих тканей. Кроме того, контраст необходим для изучения состояния сосудов – вен, артерий. На снимках КТ контраст будет выделяться белым цветом, что позволит хорошо изучить этот участок.
КТ с контрастом и онкология
В большинстве случаев процедура рекомендуется при подозрении на онкологический процесс, либо для дифференцирования доброкачественной опухоли со злокачественной. Так, рекомендуется КТ с контрастным веществом при:
- Опухолях паренхиматозных органов брюшной полости и забрюшинного пространства (при раке почек, карциноме печени, поджелудочной железы, селезенки).
- Раке полых органов брюшной полости – кишечника, желчного пузыря.
- Образованиях грудной клетки – легких, средостения, сердца.
- Опухолях головного мозга и основания черепа.
- Новообразованиях опорно-двигательного аппарата.
Томография с контрастированием позволит различить банальную и часто встречающуюся кисту почки от почечно-клеточного рака или доброкачественной липомы, ангиомы. При изучении состояния печени КТ поможет дифференцировать цирроз печени, доброкачественные опухоли и гепатоцеллюлярный рак.
Применяется КТ с контрастным усилением при лимфомах – для отличия их от другого ракового заболевания (лимфогранулематоз) или от простого лимфаденита. Контрастирование позволит установить степень ракового заболевания, его распространенность, поражение регионарных лимфоузлов, наличие метастазов. Часто назначают КТ и при малигнизации доброкачественных опухолей, которая будет заметна по ряду специфических признаков (васкуляризация, увеличение в размерах и т.д.).
Компьютерная томография с контрастным усилением весьма информативна при диагностике внутри просветных тромбов, а также тромбированных аневризм, зон сужения тромбами аорты. Также контраст позволит детально изучить сосудистые мальформации, в том числе – перед оперативным вмешательством по поводу их удаления. Обследование даст полную картину при истончении стенок вен, варикозе глубоких вен и при тромбофлебите, а также при атеросклерозе артерий.
Компьютерная томография с контрастированием применяется при заболеваниях таких зон организма:
- Полых органов – желудка, кишечника, пищевода.
- Легких, бронхов и трахеи.
- Гортани и голосовых связок.
- Головного мозга, спинного мозга.
- Основания черепа.
- Всех отделов позвоночника.
- Костей.
- Челюстей.
- Носа и пазух.
Для процедуры применяются различные препараты – ионные и неионные, с содержанием йода. Именно йод повышает интенсивность изображения, при этом вред от его проникновения в организм практически отсутствует. Самыми распространенными являются ионные препараты, но неионные еще более предпочтительны (их токсичность равна нулю).
К ионным средствам относят — Метризоат, Диатризоат, Иоксаглат,
к неионным – Йопромид, Йопамидол, Йогексол и другие.
До введения препарата врач обязательно уточняет наличие некоторых заболеваний и состояний у пациента, которые могут стать противопоказаниями к процедуре.
До обследования пациент должен сдать ряд лабораторных анализов
(биохимия крови: мочевина (2,4-6,4 ммоль/л) и креатинин (мужчины старше 15 лет — 80-150 мкмоль/л, старше 60 лет — 71-115; женщины старше 18 лет — 53-97, старше 50 лет — 53-106).
При повышении указанных показателей проведение контрастирования не проводится. Количество контрастного вещества рассчитывается исходя из веса человека.
Есть разные способы введения контраста, основные из них таковы:
- Болюсный. При болюсном способе введения в локтевую или другую вену устанавливается шприц-инжектор, у которого нормируется скорость подачи препарата.
- Внутривенный однократный. Препарат один раз вводится в вену обычным шприцем.
- Пероральный. В этом случае средство принимается через рот.
- Ректальный. Для сканирования кишечника контрастное вещество вводится через прямую кишку однократно.
Читайте также: Полноцветная печать по ткани
Противопоказаниями при КТ с конрастными веществами, содержащими йодсодержащие препараты являются:
Строгим противопоказанием к любой КТ является беременность, ведь исследование предполагает использование рентгеновского излучения. Относительное противопоказание – грудное вскармливание: после процедуры в течение 1-2 суток следует исключать кормление грудью. У томографа есть ограничение по весу пациента, и при выполнении КТ у людей с массой тела более 110-120 кг могут возникнуть сложности.
Обычно рекомендуется не выполнять процедуру чаще, чем раз в 6 месяцев. Это ограничение связано не с применением контраста, а с получением лучевой нагрузки во время КТ. Тем не менее, эта нагрузка минимальна, и по жизненным показаниям КТ может быть проведена чаще. Следует помнить, что у ряда пациентов (1-3%) наблюдаются патологические реакции на введение контрастного вещества, что также может ограничить частоту выполнения процедуры. К таким реакциям относятся:
НАТИВНЫЙ
Смотреть что такое НАТИВНЫЙ в других словарях:
НАТИВНЫЙ
нативный врожденный, природный, естественный, прирожденный Словарь русских синонимов. нативный прил., кол-во синонимов: 5 • врожденный (10) • естественный (49) • природный (17) • прирожденный (16) • родной (51) Словарь синонимов ASIS.В.Н. Тришин.2013. . Синонимы: врожденный, естественный, природный, прирожденный. смотреть
НАТИВНЫЙ
нативный естественный, натуральный, неповрежденный при исследовании; в мол. биологии термин используется для описания молекул белка, нуклеиновых кисло. смотреть
НАТИВНЫЙ
1) Орфографическая запись слова: нативный2) Ударение в слове: нат`ивный3) Деление слова на слоги (перенос слова): нативный4) Фонетическая транскрипция . смотреть
НАТИВНЫЙ
НАТИВНЫЙ (от лат. nativus— врождённый), естественный, натуральный, не повреждённый при исследовании. Напр.. Н. белки — белки, сохранившие структуру, п. смотреть
НАТИВНЫЙ
НАТИВНЫЙ ая, ое. natif,-ve adj. природный. Белки природных продуктов называют нативными (натуральными). Под воздействием различных факторов происходит. смотреть
НАТИВНЫЙ
нативный.См. природный.(Источник: «Англо-русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд-во ВНИРО, 1995 г.)С. смотреть
НАТИВНЫЙ
корень — НАТИВ; суффикс — Н; окончание — ЫЙ; Основа слова: НАТИВНВычисленный способ образования слова: Суффиксальный∩ — НАТИВ; ∧ — Н; ⏰ — ЫЙ; Слово Нат. смотреть
НАТИВНЫЙ
(от лат. nativus — врождённый) (биол.), находящийся в природном состоянии, не модифицированный, сохранивший структуру, присущую ему в живой клетке (нап. смотреть
НАТИВНЫЙ
Ударение в слове: нат`ивныйУдарение падает на букву: иБезударные гласные в слове: нат`ивный
НАТИВНЫЙ
НАТИВНЫЙ (от лат . nativus — врожденный), в биологии — находящийся в природном состоянии, не модифицированный, сохранивший структуру, присущую ему в живой клетке (напр., нативный белок).
НАТИВНЫЙ
Нативный Нива Нант Нина Нит Нтв Найти Найт Най Ный Наин Наивный Навий Выйти Вита Вит Тина Тыва Ватный Ванный Анти Ант Анин Авт Тын Ватин Ватинный Тинный Виан Винный Винт Иван Инна Твин Танин Инта. смотреть
НАТИВНЫЙ
НАТИВНЫЙ (от лат. nativus — врожденный) — в биологии — находящийся в природном состоянии, не модифицированный, сохранивший структуру, присущую ему в живой клетке (напр., нативный белок).
. смотреть
НАТИВНЫЙ
— (от лат. nativus — врожденный) — в биологии — находящийся вприродном состоянии, не модифицированный, сохранивший структуру, присущуюему в живой клетке (напр., нативный белок). смотреть
НАТИВНЫЙ
нат’ивныйСинонимы: врожденный, естественный, природный, прирожденный
НАТИВНЫЙ
nativeСинонимы: врожденный, естественный, природный, прирожденный
НАТИВНЫЙ
НАТИВНЫЙ
Начальная форма — Нативный, винительный падеж, единственное число, мужской род, неодушевленное
НАТИВНЫЙ
нативный (nativus; лат. natus рождение) — естественный, природный, врожденный.
- Свежие записи
- Балкон в многоквартирном доме: является ли он общедомовым имуществом?
- Штраф за остекление балкона в 2022: что это и как избежать наказания
- Штраф за мусор с балкона: сколько заплатить за выбрасывание окурков
- Оформление балконного окна: выбираем шторы из органзы
- Как выбрать идеальные шторы для маленькой кухни с балконом
- Правообладателям
- Политика конфиденциальности
Мастерица © 2023
Информация, опубликованная на сайте, носит исключительно ознакомительный характер