Нервная ткань импрегнация серебром

ИМПРЕГНАЦИЯ в гистологических методах исследования (позднелат. impraegnatio наполнение) — специальный метод выявления структур клеток и тканей, основанный на различной их способности удерживать или восстанавливать соли тяжелых металлов (напр., серебра, свинца, осмия, золота), растворами которых были пропитаны объекты микроскопирования, в связи с чем определенные участки их оказываются окрашенными в черный, бурый или другой цвет.

Наиболее важным этапом И. является восстановление металлической соли, к-рое чаще обусловливается редуцирующим (восстанавливающим) действием некоторых веществ, содержащихся в определенных компонентах тканей (аскорбиновая к-та, адреналин, креатин, глютатион, некоторые пигменты и пр.). В ряде случаев объект обрабатывают редуцирующими реактивами (формалин, пирогалловая к-та и т. п.); иногда в качестве редуцирующих агентов при И. используют солнечный свет или ультрафиолетовое облучение от искусственных источников, подкис ление, нагревание и т. д.

В процессе И. большое значение имеют размеры межмицеллярных пространств тканевых элементов, электростатические свойства микроскопических структур, размер образующихся частиц восстановленного металла и т. п. Поэтому успех И. в значительной степени определяется способом фиксации, pH применяемых р-ров, чистотой используемых реактивов и другими факторами. Меняя условия П., можно достичь избирательного выявления тех или иных тканевых элементов в зависимости от задач исследования.

Более глубоко изучена И. серебром. Успех серебрения во многом зависит от соответствующей микроскопической и субмикроскопической плотности тканевых элементов и невысокого содержания в них защитных коллоидов (см. Серебрения методы).

И. солями серебра используют для выявления нервных клеток, нейроглиальных элементов, периферических нервных волокон и их окончаний (см. Бильшовского-Грос-Лаврентьева метод), ретикулярной стромы органов, межклеточного вещества эпителия и гладкой мускулатуры, бледных трепонем и др.

В. В. Куприянов (1958) применил И. азотнокислым серебром соединительнотканных оболочек для исследования их кровеносных и лимф, сосудов. На препаратах становятся видимыми многие детали строения сосудистой стенки, включая особенности клеточных элементов. В основе этой модификации лежит методика, предложенная Е. И. Рассказовой (1954) для И. нервных элементов.

С целью улучшения качества препаратов срезы после И. серебром нередко тонируют солями золота (см. Золочения методы). Соли золота можно заменить насыщенным р-ром сероводорода в дистиллированной воде или 25% р-ром сернистого натрия. Хлорное и хлористое золото восстанавливается в жирах и богатых липидами, особенно миелином, участках тканей, окрашивая их в фиолетовый цвет. Из способов И. солями золота сохранили значение метод выявления нейроглии по Рамон-и-Кахалю (1926) в различных модификациях, а также ряд методов И. миофибрилл, нейрофибрилл и нервных окончаний.

И. осмием (чаще четырехокисью осмия) служит преимущественно для выявления жиров и липоидных веществ (окрашиваются в оливковочерные или коричневые тона). И. осмием понижает растворимость жиров в абсолютном спирте, хлороформе, эфирных маслах и др., вследствие чего этот метод обладает преимуществом, особенно при изучении миелиновых нервных волокон. И. осмием применяют также для выявления пластинчатого комплекса (комплекса Гольджи) в клетках, а также для фиксации клеток с целью дальнейшей электронной микроскопии (см.).

Библиография: Морфологические основы микроциркуляции, под ред. В. В. Куприянова, с. 20, М., 1965; Меркулов Г. А. Курс патологогистологической техники, с. 181, Л., 1969, библиогр.; P о м e й с Б. Микроскопическая техника, пер. с нем., М., 1954, библиогр.; P о с к и н Г. И. и Левинсон Б. JI. Микроскопическая техника, с. 211, М., 1957.

СЕРЕБРЕНИЯ МЕТОДЫ

СЕРЕБРЕНИЯ МЕТОДЫ (син. методы импрегнации серебром) — способы выявления тканевых и клеточных компонентов (структур) путем пропитывания гистологических препаратов солями серебра. Серебрения методы относятся к методам импрегнации тканевых структур солями металлов (см. Импрегнация). Восстановление (редукция) металлического серебра приводит к осаждению его на определенных структурах, к-рые приобретают коричневый или черный цвет. Среди тканевых компонентов различают аргентаффинные, в к-рых редукция серебра осуществляется в темноте за счет их собственных восстановительных свойств (см. Аргентаффинные клетки), и аргирофильные, в к-рых серебро осаждается только под действием света или хим. восстановителей (см. Аргирофильность). Сущность Серебрения методов остается не вполне ясной, большинство этих методов основано на эмпирических разработках. По-видимому, в феномене аргентаффинности определенная роль принадлежит присутствию в клетках производных катехоламинов (см.), а развитие аргирофилии связано, в, частности, с наличием в тканевых компонентах сульфгидрильных групп (SH-групп) и ненасыщенных жирных к-т.

Читайте также: Под молнию попала ткань

Из солей серебра для С. м. обычно используют 0,5—20% р-ры нитрата серебра, нередко в виде аммиачного серебра (см. Бильшовского — Грос — Лаврентьева метод). Применяют также ацетат, карбонат, пикрат, лактат серебра, протаргол и др. Во всех случаях для С. м. требуются химически чистые реактивы и посуда; работать следует стеклянными иглами, избегая соприкосновения препаратов с металлом.

В зависимости от цели С. м. проводят либо на свежих, нефиксированных препаратах, либо после фиксации, чаще 10—20% р-ром формалина. Без фиксации С. м. выявляют межклеточные границы эпителия и мезотелия (см. Ранвье методы). Серебро может служить также агентом, фиксирующим ткань. Фиксирующие свойства р-ров серебра используют при импрегнации выстилки альвеол по методу Эберта, когда через бронх или трахею наполняют долю или все легкое 0,5% р-ром нитрата серебра с последующим УФ-об-лучением замороженных срезов легкого, а также для выявления нейрофибрилл в свежих кусочках ткани мозга (см. Рамон-и-Кахаля методы).

Дин и Морс (Н. W. Deane, A. Morse, 1948) предложили использовать восстановительные свойства аскорбиновой к-ты (витамина С) для выявления ее включений в тканях: свежие кусочки ткани обрабатывают насыщенным р-ром нитрата серебра в смеси спирта, воды и ледяной уксусной к-ты, затем их переносят в кислый фиксаж, обезвоживают и заливают в парафин. Под микроскопом включения витамина С наблюдаются в виде черных точек.

На фиксированных препаратах С. м. позволяют элективно выявлять многие элементы нервной ткани (нервные клетки, нейрофибриллы, нейроглию, осевые цилиндры и узлы миелиновых нервных волокон, безмиелиновые волокна, нервные окончания), аргирофильные волокна соединительной ткани, аргентаффинные клетки желудка и кишечника (аргентаффиноциты), хромаффинные клетки надпочечников и параганглиев, нек-рые пигменты, а также известь (см. Коссы способы) и др. Методы серебрения применяют также в бактериологии (см. Левадити метод), вирусологии (см. Морозова метод), цитологии — импрегнация комплекса Гольджи (см, Гольджи комплекс), выявление ядрышковых организаторов (см. Ядрышко).

Разработан ряд вариантов С. м. для выявления определенных элементов нервной ткани в различных отделах нервной системы. Эти варианты различаются по составу фиксирующих смесей и способам редукции серебра. Так, элементы нервной ткани изучают либо путем обработки серебром целых кусочков ткани (тотальная импрегнация) с последующим изготовлением срезов, напр, при тотальной импрегнации с пиридином по Бильшовскому, варианте этого способа — методе Буке, а также при использовании методов Гольджи, Рамон-и-Кахаля (см. Гольджи метод, Рамон-и-Кахаля методы), либо путем импрегнации замороженных срезов (см, Бильшовского — Г рос — Лаврентьева метод, Миягавы — Александровской метод, Ортеги методы). Периферические нервы и их окончания хорошо выявляются по методу Кампоса, представляющего собой модификацию метода Билыновского — Грос— Лаврентьева.

Для серебрения аргирофильных волокон (см.) на срезах соединительной ткани применяют различные варианты предложенного в 1904 г. для выявления нейрофибрилл метода Бильшовского (см. Бильшовского — Грос — Лаврентьева метод). Мареш (R. Maresch, 1905) применил этот метод для импрегнации фибрилл соединительной ткани. В методе Фута до импрегнации до методу Бильшовского замороженные срезы обрабатывают р-рами перманганата калия и щавелевой к-ты. Импрегнация аргирофильных волокон по методу Валльгрена в настоящее время почти не применяется. Применяют также метод Ачукарро в модификациях Ортеги (Р. del Rio Hortega) для замороженных срезов и Кларфельда (Klarfeld) — для целлоидиновых срезов (см. Ортеги методы). Хорошие результаты дают также методы, предложенные П. Е. Снесаревым для замороженных и парафиновых срезов (см. Снесарева методы).

При всех С. м. быстрое прекращение серебрения достигается путем погружения препаратов в аммиачную воду (разведенный в три раза 25% р-р аммиака). Избыточное осаждение серебра можно устранить дифференцировкой в 0,25% р-ре перманганата калия, 2% р-ре персульфата аммония и др. После применения С. м. срезы можно тонировать р-рами солей золота (см. Золочения методы).

Библиография: Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия, пер. с англ., с. 216, 222, М., 1969; Меркулов Г. А. Курс патологогистологической техники, с. 181, Л., 1969; Ромейс Б. Микроскопическая техника, пер. с нем., с. 309, М., 1954.

Читайте также: Свойство ткани блеск льняной ткани

О значении импрегнации серебром нервных волокон кожи для диагностики прижизненности повреждений

Кафедра судебной медицины (зав. — доцент И.В. Скопин) Саратовского государственного медицинского института

Поступила в редакцию 9/V 1958 г.

библиографическое описание:
О значении импрегнации серебром нервных волокон кожи для диагностики прижизненности повреждений / Козлов В.В. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1960. — №1. — С. 18-21.

За последние годы в судебномедицинской литературе появились высказывания о возможности использования импрегнации серебром нервных волокон кожи с целью дифференциальной диагностики между прижизненными и посмертными повреждениями. Импрегнируя серебром нервные волокна кожи, Б.И. Зорин (1954), М.А. Файн (1955-1956), В.Г. Науменко (1955), И.А. Концевич (1958), Л. Л. Сотникова и Л. А. Семененко (1958) находили в области прижизненных повреждений изменения, качественно отличные от посмертных. По мнению этих авторов, варикозность, вакуолизация, фрагментация и распад нервных волокон являются результатом прижизненных повреждений и: не встречаются в области пореждений посмертного характера.

Задача настоящей работы сводилась к тому, чтобы, применяя импрегнацию серебром, выяснить принципиальную возможность использования полученных указанными авторами данных в практических судебномедицинских целях.

Исследованию подвергались ссадины, странгуляционные борозды, электрометки, отморожения первой степени (ознобления) и ожоги.

Прижизненные повреждения, причиненные в ближайшие сроки до наступления смерти или в агональном периоде, изучались на текущем секционном материале, посмертные — на экспериментальных животных (поросята).

Животных убивали путем обескровливания; повреждения наносили спустя 5—15 минут после наступления клинической смерти.

Кусочки кожи с повреждениями фиксировали в 12% нейтральном формалине и резали на замораживающем микротоме; срезы импрегнировали серебром по методу Бильшовского-Грос в модификации Лаврентьева. Всего было изучено 320 препаратов (плоскостных и отвесных срезов) от 47 повреждений (30 прижизненных и 17 посмертных).

При исследовании прижизненных повреждений наиболее резкие изменения нервных волокон кожи были выявлены в области электрометок.

В прижизненных электрометках многие нервные стволики имели вид сплошных грубых тяжей, диффузно импрегнированных серебром. Осевые цилиндры и ядра шванновской оболочки, как правило, были неразличимы или выявлялись лишь на концах пучка. В более мелких пучках мякотные волокна оказывались резко аргентофильными; наряду с этим часто отмечалась неравномерная импрегнация оболочки. Контуры мякотных волокон были неровными, как правило, отмечалась варикозность осевого цилиндра в виде часто расположенных округлых четкообразных вздутий или неравномерно чередующихся овальных и лентовидных утолщений. Мякотная оболочка волокон содержала большое количество вакуолей, иногда же — на отдельных участках — почти сплошь состояла из них. Очень часто наблюдалось резкое истончение осевого цилиндра, местами с исчезновением оболочки, в этом участке отмечалась фрагментация и распад волокон в пучке. По ходу безмякотных волокон иногда встречались четкообразные утолщения тонких волоконец и изредка их распад (рис. 1).

Рис. 1. Четкообразная варикозность, чередующаяся с резким истончением осевого цилиндра, фрагментация и распад нервных волокон в области прижизненной электрометки.

Не менее резко выраженные изменения нервных волокон кожи наблюдались в области прижизненных ожогов. Не отличаясь от описанных выше в качественном отношении, эти изменения характеризовались преобладанием неравномерной импрегнации оболочек мякотных нервных волокон — в виде чередования слабо окрашенных участков с отложением глыбок серебра, а также наличием варикозности, вакуолизации, фрагментации и распада нервов в пучках. Очень часто отмечалась резкая аргентофилия и грубая импрегнация отдельных волокон и целых пучков.

В области прижизненных ссадин изменения нервных волокон кожи по сравнению с предыдущими повреждениями оказались значительно менее выраженными как в качественном, так и в количественном отношении. В большинстве препаратов наблюдались неравномерные утолщения волокон, изредка — истончение осевого цилиндра, грубая импрегнация, аргентофилия и неравномерная окрашнваемостъ оболочек мякотных волокон. Значительно реже наблюдалось образование вакуолей, очень редко явления распада и фрагментации волокон (рис. 2).

Такого же характера, но еще более слабо выраженными, были изменения нервных волокон кожи в области прижизненных странгуляционных борозд, и в ссадинах, и в странгуляционных бороздах большое количество неизмененных нервных волокон и целых пучков.

В области участков ознобления изменения нервных волокон были наиболее слабо выраженными и сводились в основной к неравномерной их импрегнации, утолщению осевых цилиндров и изредка к распаду отдельных волокон в пучке. В препаратах превалировали совершенно не измененные нервные волокна.

Читайте также: Фасоны туника из легкой ткани

При исследовании посмертных повреждений в большинстве случаев удалось обнаружить почти все те качественные изменения нервных волокон кожи, которые наблюдались нами в случаях прижизненной травмы. При этом особенно выраженными оказались изменения нервных волокон кожи в области электрометок. Однако степень выраженности и главным образом частота этих изменений оказались отличными от прижизненных.

В области повреждений посмертного характера наблюдалось наибольшее количество морфологически не измененных нервных волокон, в’ то время ка» в области прижизненных повреждений изменения являлись постоянными, ярко выраженными и распространялись на большую массу нервных волокон. Однако следует отметить, что почти в каждом препарате из области прижизненного повреждения встречалось довольно большое количество внешне не измененных волокон и даже целых пучков.

Рис. 2. Неравномерные утолщения по ходу осевого цилиндра, вакуолизация и аргентофилия волокон в области прижизненной ссадины.

Иногда неизмененные волокна настолько превалировали, что было, крайне затруднительно сделать какие-либо выводы. Следует подчеркнуть, что речь идет о повреждениях, причиненных в ближайшее время (первые минуты) до или после наступления смерти. Увеличение сроков, прошедших между травмой и смертью, влечет за собой значительно большую количественную разницу в изменениях нервных волокон, а при длительных сроках эта разница очень резко выражена.

Изучая в качестве контроля нервные волокна здоровой кожи, мы обратили внимание на то, что волокна имели вид интактных только в случаях взятия свежего материала, когда с момента наступления смерти до изъятия кусочков кожи проходило от нескольких минут (в эксперименте на животном) до нескольких часов.

В случаях взятия материала через 12, 24, 48 часов и более после наступления смерти некоторые нервные волокна заведомо неповрежденной кожи претерпевали почти те же изменения, которые наблюдались в области описанных выше различных повреждений прижизненного характера.

Приведенные наблюдения свидетельствуют о ряде посмертных превращений в периферических нервах кожи, морфологически имитирующих прижизненные дистрофические и некробиотические процессы. Эти превращения, на наш взгляд, требуют детального изучения в разрезе дифференциальной диагностики прижизненных и посмертных изменений нервных волокон.

В области прижизненных электрометок, ссадин, странгуляционных борозд, ожогов и озноблений наблюдаются изменения периферических нервов кожи в виде аргентофилии, варикозности, вакуолизации, фрагментации и распада волокон. Они, как правило, постоянны, ярко выражены и распространяются на значительное количество нервных волокон. Наиболее глубокие изменения наблюдаются в области прижизненных электрометок и ожогов.
Такого же характера изменения могут быть обнаружены в области посмертных повреждений, однако они, как правило, менее выражены и выявляются на фоне большого количества морфологически не измененных волокон.
Количественная разница в изменении нервных волокон кожи в области прижизненных и посмертных повреждений может быть установлена путем серийного изучения плоскостных срезов из каждого исследуемого объекта.
Увеличение сроков, прошедших между травмой и смертью, влечет за собой значительно большую количественную разницу в изменении нервных волокон кожи в области прижизненных повреждений в отличие от посмертных.
При изучении нервных -волокон кожи при различных повреждениях следует одновременно подвергать контрольному исследованию заведомо неповрежденные участки. Материал для исследования следует брать в наиболее ранние сроки после наступления смерти (желательно не позднее 12 часов).
Изменения нервных волокон наиболее целесообразно изучать на плоскостных срезах, позволяющих выявить наибольшее количество периферических нервных волокон, располагающихся в сетчатом слое кожи.
Импрегнация срезов серебром для выявления характера и степени выраженности изменений ‘периферических нервных волокон кожи может быть использована наряду -с другими исследованиями -в качестве дополнительного метода, подтверждающего прижизненный или посмертный характер повреждения.

Нервная ткань импрегнация серебром

СЕРЕБРЕНИЯ МЕТОДЫ

О значении импрегнации серебром нервных волокон кожи для диагностики прижизненности повреждений

похожие статьи