Основная роль белков костной ткани

Кроме гликозаминогликанов и коллагена, в составе матрикса костной и хрящевой ткани животных присутствуют белки неколлагеновой природы (табл. 2). Эти белки участвуют во взаимодействиях между клетками и выполняют адгезионные функции, обеспечивают процессы пролиферации, дифференциации и миграции клеток.

К неколлагеновым белкам хрящевой ткани относятся фибронектин и ламинин, которые взаимодействуют с фибробластами или клетками эндотелия. Молекулярная масса фибронектина составляет около 250 000 Да. Ламинин – это также гликопротеин, образованный одной большой и тремя более короткими цепями, представляющий собой крестообразную молекулу с м.м. около 800 000 Да. Фибронектин – это гликопротеин, состоящий из двух сходных, но не идентичных субъединиц, соединенных дисульфидной связью (Mosher, 1989).Оба эти белка полифункциональны – стимулируют пролиферацию, дифференциацию и миграцию клеток.

Важную группу адгезивных белков составляют кадгерины(calcium dependent cell adhesion molecules), которые подразделяются на группы E, N, P и, как следует из их названия, влияют на клеточную адгезию только при наличии кальция. Относительно недавно были описаны сельктины(selctins), названные также Lec-CAMs. Один их домен, который связывается с карбогидратами, гомологичен, по-видимому, домену, присутствующему в лектинах (L), или в эпидермальном факторе роста (E), или в белках связывающих комплемент (P).

В межклеточных взаимодействиях большую роль играют другие белки. Это фосфорилированный белок – остеопонтин, чей синтез ингибируется кальцитонином. Анализ первичной последовательности белка (Prince et al., 1987) и кодирующей его ДНК позволил установить несколько интересных фактов, включая наличие повторов богатых аспарагиновой кислотой, которые, вероятно, придают остеопонтину способность связываться с гидроксилаппатитом, и каноническую последовательность аминокислот RGD (Arg-Gly-Asp в средней части молекулы), ответственную за адгезию клеток (Grzesik et al., 1993).

Основные неколлагеновые белки костной ткани животных и человека (по Риггз и Мелтон ,2000)

Гликозилированный, фосфорилированный протеин; множественная низкая аффинность к Са2 + две структуры E–F hand, гомология с овомукоидом

Содержит 60 % углеводов(7 % – сиаловая кислота), 8 % фосфатов

Связывание Са2 + и гидроксиапатита, сайты связывания такие же, как у фибронектина; связывается с остеонектином; клеточная адгезия без распластывания

Сайты связывания с поверхностью клеток, фибрином, гепарином, бактериями, желатином, коллагеном, ДНК; начальное прикрепление клеток

Связывается со многими белками матрикса и сыворотки, ответственными за прикрепление клеток

Остеопонтин (BSP-1, 2ar, SPP-1, pp69)

Содержит N- и О-связанные олигосахариды, фосфосерин и тирозин, участвует в прикреплении клеток

Содержит 50 % углеводов (12 % – сиаловая кислота); у некоторых видов происходит сульфатирование тирозина; участвует в прикреплении клеток

Белки, содержащие γ-карбоксиглутаминовую кислоту:

Одна внутримолекулярная связь S–S, 5 остатков gla

Одна внутримолекулярная связь S–S, 3–5 остатков gla, связывание с гидроксиапатитом, зависимое от gla

* – Определено с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН.

RGD – последовательность аминокислот Arg-Gly-Asp.

Еще один белок, идентифицированный в хрящевой ткани – остеонектин, называемый также SPARC (secreted protein acidic rich in cysteinе). Это фосфорилованный гликопротеин c молекулярной массой 43000–46000 Да. Остеонектин найден в остеобластах, одонтобластах и в небольшом количестве в хондроцитах (Bianco et. al., 1988). Исследования in vitro показали, что число типов клеток, которые синтезируют остеонектин, намного больше, чем это было отмечено in vivo. К ним относятся фибробласты (Otsuka et al., 1988), и эндотелиальные клетки (Sage, 1986). В связи с этим остеонектин имеет еще одно название «культуральный шоковый протеин», которое говорит о том, что в условиях тканевых культур его продукция быстро усиливается. N-концевые последовательности данного белка отличаются высокой кислотностью, что может сказываться на конформации α-спирали с образованием до 12 участков связывания кальция, имеющих структуру типа EF-hand. В остеонектине имеется богатая цистеином область, аминокислотные последовательности в которой гомологичны овомукоиду и другим ингибиторам сериновых протеиназ. Наличие этих последовательностей необычно для секретируемого белка, но участки связывания кальция, как и те последовательности, которые присутствуют в N-концевом отделе молекулы, придают остеонектину способность связывания с гидроксилапатитом (Termine et al., 1981). Функции, которые выполняет остеонектин в различных тканях, полностью не изучены. Исследования in vitro позволили предположить, что этот белок регулирует пролиферацию и взаимодействия клеток матрикса.

Из хрящевой ткани выделен высокомолекулярный гликопротеид – хондронектин. Его молекулярная масса составляет 180 000 Да. Установлено, что хондронектин синтезируется in vivo хондроцитами (Tryggvason et al., 1987).

Остеокальцин, присутствующий как в тканях, так и в сыворотке крови, обозначается также как GLA-протеин или BGP (bone GLAprotein), так как в своей молекуле он содержит от 3-х до 5-ти остатков γ-карбоксиглутаминовой кислоты (GLA). Глутаминовая кислота в его молекуле посттрансляционно карбоксилируется в позициях 17, 21, 24 в присутствии витамина К.

Из минерализованных участков позвонков атлантической суповой акулы (Galeorhinus galeus) был выделен витамин-К-зависимый матриксный гликопротеин(Rice et al., 1994). Его количество составляет 35–40 % от общего количества неколлагеновых белков акулы. Он почти нерастворим в нейтральной среде и сохраняет способность к самоагрегации, которая может быть важной, но еще непонятой функцией. Этот гликопротеин содержит четыре аминокислотных остатка в 102–106 положениях. Молекулярная масса белка составляет 12 770 Да, что не на много меньше молекулярной массы Gla-протеина животных и человека (Риггз, Мелтон, 2000). Первые N-концевые 76 аминокислотных остатка гликопротеина акулы гомологичны последовательности Gla-протеина млекопитающих на 37 %, а С-концевые 23 аминокислотных – отличаются. Этот С-терминальный сегмент акульего белка содержит только 8 основных аминокислот. Особенность Gla-протеина акулы и млекопитающих, а также всех известных витамин-К зависимых белков – это гомологичный участок из 15 аминокислотных остатков, функции которого пока не установлены.

Читайте также: Как лечить ушибы мягких тканей в домашних условиях

Исследования низкомолекулярных белков хрящей акул показали, что белок из рифовой акулы (Carcharhinus springeri) обладает поразительным сходством с тетранектином из плазмы крови. Белок был выделен путем экстрагирования хряща в растворе 4 М гуанидинхлорида. Его аминокислотная последовательность представлена 166 аминокислотными остатками при м.м. – 18 430 Да. Белок на 45 % идентичен тетранектину человека и участвует в процессе минерализации хрящевой ткани (Neamen et al., 1992). Тетранектин – глобулярный белок плазмы крови – состоит из четырех нековалентно связанных полипептидов с м.м. приблизительно 21 000 Да. Существует предположение, что тетранектин может принимать участие в фибринолизе и протеолизе тканей (Wewer et al., 1994).

Особенности метаболизма белков соединительной ткани. Регенерация костной и хрящевой тканей

Введение

После изучения данной обучающей презентации у врачей травматологов-ортопедов появится четкое понимание об основных биохимических вопросах, которые касаются характеристики белкового обмена в соединительной ткани. Данная презентация поможет понять роль различных белков для различных вариантов соединительной ткани. Прояснит понимание роли различных типов коллагенов. Даст базовые знания о синтезе и деградации коллагена и эластина. Очень важно, что данная обучающая презентация продемонстрирует роль витаминов для обменных процессов в соединительной ткани. Особенно важно из всех витаминов отметить роль витамина С и холекальциферола. Данная презентация выделит роль пролилгидроксилазы и лизилоксидазы для обмена коллагена и эластина. Также после изучения данной презентации у травматологов-ортопедов будет четкое понимание этапов коллагеногенеза и его регуляции. Врачи указанного профиля получат информацию о ремоделировании и деградации коллагена и об основах регенерации костной и хрящевой тканей.

Состав костной ткани

• Костная и хрящевая ткани — это специализированный тип соединительной ткани.
• Костная ткань отличается высокой минерализацией (или кальцифекацией) межклеточного матрикса и содержит по массе около 50% неорганических соединений, 25% органических соединений и 25% воды.
• В состав костей входит 99% всего кальция организма (в виде гидроксиапатита: Са10(РО4)6 (ОН)2).
• Органические соединения в костной ткани представлены белками, липидами и гетерополисахаридами.
• Основную долю органических веществ составляют белки (90% — это коллагеновые белки).

Синтез костного матрикса — остеобласты

Синтез костного матрикса осуществляется остеобластами (4-6% от всех клеток костной ткани) в два основных этапа:

1. Осаждение органического матрикса: секретируются коллагеновые белки, главным образом коллаген I типа, неколлагеновые белки (остеокальцин, остеонектин, ВМР-2, остеопонтин и протеогликаны, включая декорин и бигликан), которые образуют органическую матрицу.

2. Последующая минерализация органического матрикса, которая происходит в две фазы:

• везикулярную (матричные везикулы высвобождаются из апикального мембранного домена остеобластов; в них сульфатированные протеогликаны иммобилизируют кальций; при необходимости ферменты остеобластов разрушают протеогликаны, и кальций высвобождается через Са2+-каналы везикул, которые образованы белками аннексинами),
• фибриллярную.

Остеокласты

Остеокласты примечательны своим строением и наличием ферментов резорбции костной ткани:

• лизосомальной Н+-АТФ-азы вакуольного типа,
• тартрат-резистентной кислой фосфатазы,
• катепсина К,
• матричной металлопротеиназы-9 (ММР-9)

Увеличение количества остеокластов и их активности (например, при воспалении или метастатическом поражении) приводит к остеопорозу или остеолизису.

Состав хрящевой ткани

• Интерстициальная вода составляет 65-85%;
• коллагеновые белки составляют до 25% от состава межклеточного вещества;
• хрящевая ткань содержит больше эластиновых волокон, чем костная ткань;
• протеогликаны составляют приблизительно от 5 до 10%;
• клетки (хондроциты) составляют не более 10% от массы хряща.

Неколлагеновые белки костной и хрящевой тканей

Коллаген и его типы

Коллаген — основной белок соединительной ткани многоклеточных организмов

• Коллаген — основной нерастворимый фибриллярный белок соединительной ткани и внеклеточного матрикса.
• Термином «коллаген» названа группа белков, формирующих характерную тройную спираль из трех полипептидных цепей.
• Данные белки отличаются по размеру, функциям, распределению в тканях.
• В настоящее время описано 28 типов коллагена.
• Коллагены I, II, III типов доминантные в организме человека, на их долю приходится около 95 % от всех типов коллагена.

• содержится в костях, коже, сухожилиях, связках, роговице, склере, кровеносных сосудах;
• самый распространенный в организме;
• составляет 95% от различных типов коллагенов костей 80% от всех белков костной ткани;
• гетеротример: две α₁ цепи и одна α₂
• каждая цепь состоит из

• N-концевой (терминальный) пропептид проколлагена I типа (PINP), N-терминальный пропептид проколлагена I типа (используется в клинической практике);
• С-концевой (терминальный) пропептид проколлагена I типа (PICP).

• Маркёры деградации и резорбции:
  • С-концевой (терминальный) телопептид проколлагена I типа (СТХ-1, β-CrossLaps) (используется в клинической практике),
  • неоэпитоп коллагена I типа (С1М).
  • содержится в хрящах, межпозвонковых дисках, стекловидном теле;
  • ген Со12А1 максимально экспрессирован в экстрацеллюлярном матриксе и суставных хрящах;
  • три идентичные α₁ цепи, т.е. гомотример;
  • так же, как и коллаген I типа, образует фибриллы приблизительно 300 нм длиной и 1,5 нм в диаметре;
  • как и все фибриллообразующие коллагены синтезируется в виде проколлагена;
  • С-концевой пропептид — это неколлагеновый домен (NC1), состоит из трех идентичных цепей;
  • N-концевой пропептид содержит три домена: NC2, Col2, NC3; при остеоартрите реэкспрессирован эмбриональный домен N-пропептида — PIIBNP (ингибирует выживаемость остеокластов и соответственно резорбцию);
  • взаимодействует с коллагенами XI и IX типов и с небольшими протеогликанами, богатыми лейцином.
  • содержится в коже, стенке сосудов, лёгких, печени, селезенке;
  • гомотримерный коллаген (три α₁ цепи);
  • участвует в фибриллогенезе коллагена I типа в коже, сердечно-сосудистой системе и в кишечнике;
  • костный морфогенетический белок 1 (ВМР-1) вовлечен в скорость-лимитирующий этап удаления С-концевого пептида;
  • процессинг проколлагена III типа повышается в присутствии энхансеров проколлаген-С-протеиназы (РСРЕ). Идентификация и связывание РСРЕ — это перспективная мишень антифибротической терапии;
  • «молодая» рубцовая ткань содержит в основном коллаген III типа и небольшое количество коллагена I типа. Однако при «старении» рубца соотношение коллагена I/III типов становится 1/г. При келлоидах и гипертрофических рубцах отмечается превалирование коллагена III типа;
  • является лигандом для рецептора G-белка (GPR56). Данное взаимодействие определяет развитие коры больших полушарий;
  • также взаимодействует с интегрином α₂β₁ и фактором Виллебранда, т.о. участвует в адгезии и в регенерации сосудов.
  • содержится в базальных мембранах;
  • содержит повторяющиеся длинные (400 нм) спирализованные участки, которые прерываются короткими неспирализованными фрагментами;
  • наиболее гибкий коллаген, в 26 местах его тройная спираль прерывается неколлагеновой аминокислотной последовательностью;
  • обеспечивает взаимодействие между ламинином, гепарансульфатом, перлеканом, нидогеном, факторами роста и клетками;
  • N- и С-концевые пропептиды не отщепляются и являются местом связывания (остатки цистеина и лизина) при образовании олигомерных форм коллагена;
  • секретируется эндотелиоцитами, эпителиоцитами, миоцитами, адипоцитами и др.;
  • содержит различные α-цепи (α_1-6);
  • N-концевой коллагеновый домен (7S) богат цистеином и лизином, имеется связь между лизином и гидроксилизином, сильно гликозилирован, т.о. защищен от воздействия коллагеназ;
  • центральный коллагеновый домен содержит около 1400 аминокислотных остатков;
  • С-концевой глобулярный домен (NC) содержит много метионина и лизина, которые между собой образуют связь;
  • синдром Гудпасчера и синдром Альпрота связаны с аутоиммунным поражением почечных базальных мембран (содержат коллаген IV типа) и развитием гломерулонефрита.
  • содержится в костях, роговице, лёгких, плаценте, вместе с коллагеном I типа;
  • минорный длинный фибриллярный коллаген (390 нм);
  • имеет глобулярный N-домен;
  • коллаген V типа необходим для фибрилляции коллагенов I и III типов;
  • коллаген данного типа связывается с ДНК, гепарансульфатом, гепарином,инсулином,тромбоспондином;
  • гетеротример: α₁2α₂.
  • содержится в коже, хрящах, лёгких, плаценте, сосудистой стенке, межпозвонковых дисках, экстрацеллюлярном матриксе;
  • коллаген, формирующий микрофибриллы;
  • короткоцепочечный коллаген, имеет глобулярные домены, которые длиннее коллагеновых;
  • латерально ассоциирован с коллагеном I типа;
  • две молекулы формируют димер, а затем превращаются в тетрамер;
  • содержит большое количество последовательностей Арг-Гли-Асп, благодаря чему взаимодействует с интегринами и участвует в клеточной адгезии (связывается с фибробластами, хондроцитами, гемопоэтическими и опухолевыми клетками);
  • также связывается с декорином, фибронектином, перликаном, бигликаном и тенасцином;
  • находится рядом с базальной мембраной;
  • гетеротример: α₁α₂α₃;
  • является ранним сенсором ответа на повреждение, регулирует фиброгенез и отвечает за межклеточное взаимодействие.
  • содержится в коже (эпидермально-дермальное соединение), слизистой оболочке ротовой полости;
  • коллаген, формирующий «заякоренные фибриллы»;
  • синтезируется кератиноцитами и фибробластами;
  • имеет длину 450 нм;
  • содержит два концевых неколлагеновых домена и один центральный — коллагеновый;
  • формирует димеры, соединяясь антипараллельно с неколлагеновым N-концевым доменом.
  • содержится в эндотелиальных клетках, десцеметовых мембранах эндотелия роговицы;
  • короткоцепочечный коллаген;
  • молекулы этого коллагена собираются антипараллельно с образованием тетрамеров, формируя гексагональные решётки, которые и обеспечивают прозрачность роговицы.
  • содержится в хрящах, роговице;
  • коллаген, ассоциированный с фибриллами;
  • состоит из трёх коллагеновых (К, фибриллярных) доменов и четырёх неколлагеновых (НК, глобулярных) доменов;
  • антипараллельно присоединяется к коллагену II типа (ограничивает размер фибрилл) Лиз-Лиз мостиками (К1, К2, НК1, НК2, НКЗ);
  • НК4-домен положительно заряжен и необходим для связи с гиалуроновой кислотой или хондроитинсульфатом при организации межклеточного матрикса в хрящах;
  • латерально ассоциируется с коллагеном II типа.
  • содержится в гипертрофированном хряще;
  • в норме составляет 1% от коллагенов хрящевой ткани;
  • короткоцепочечный коллаген;
  • как и коллагены IV и VIII типов, коллаген данного типа формирует сетеподобные структуры;
  • гомотример (состоит из трех α₁ цепей);
  • связывает кальций.
  • содержится в хрящах, стекловидном теле;
  • минорный коллаген, образующий фибриллы;
  • гетеротример (α₁α₂α₃);
  • дефект гена данного типа коллагена приводит к развитию:
    • синдрома Стиклера (группа наследственных коллагенопатий (II, IX и XI типов коллагена, другое название — наследственная артроофтальмопатия. Заболевание характеризуется изменениями лица, поражением глаз, потерей слуха и патологией суставов),
    • синдрома Маршала (гипоплазия средней зоны лица, спондилоэпифизарные аномалии, расщелина неба и сенсоневральная тугоухость, эктодермальная дисплазия с гипертрихозом и гипогидрозом, утолщением костей свода черепа, гипертелоризм).
    • содержится в скелетных мышцах, коже, костях, сухожилиях, связках;
    • коллаген, ассоциированный с фибриллами (стабилизирует коллаген I типа);
    • гомотример (состоит из трех α₁ цепей);
    • участвует в дифференцировке остеобластов и формировании костной ткани, также регулирует полярность фибробластов;
    • содержит большое количество пептидных последовательностей;
    • Арг-Гли-Асп для связи с β₁ интегрином;
    • нарушение синтеза данного типа коллагена приводит к снижению содержания белков костного матрикса остеокальцина и остеопонтина;
    • дефект гена данного типа коллагена приводит к развитию синдрома Элерса-Данло, при этом клинически выражена гипермобильность суставов и мышечная слабость.

    Регенерация костной и хрящевой тканей

    На регенерацию костной и хрящевой тканей влияют:

    • нормальный генетический профиль,
    • нормальный гормональный профиль,
    • обеспеченность витаминами: С, В6, РР, К, D3,
    • обеспеченность металлами: Fe2+, Си, Са2+, Zn2+,
    • нормоксия,
    • BMPs,
    • факторы роста (PDGF),
    • наличие клеток предшественников.

    Имплантация аутологичных хондроцитов

    • Более современные подходы к регенерации хряща включают имплантацию аутологичных хондроцитов (ACI) и теперь имплантацию аутологичных хондроцитов, связанную с матрицей (MACI), а также индуцированный аутологичным матриксом хондрогенез (AMIC).
    • MACI — это двухэтапная процедура (и прогресс по сравнению с оригинальной процедурой ACI), при которой здоровые хрящевые клетки собирают у пациента, размножают, высевают в коллагеновую матрицу и затем повторно имплантируют в дефект хряща. AMIC, с другой стороны, является одностадийной процедурой, при которой бесклеточный коллагеновый матрикс имплантируется в дефект хряща.
    • TGF-B1 (трансдуцированные аллогенные хондроциты (Invossa), внутрисуставная инъекция) продемонстрировал высокий индекс пролиферации гиалинового хряща.

    Терапия плазмой, обогащенной тромбоцитами (PRP)

    • PRP модулирует воспалительную и катаболическую среду через локально нанесенный концентрат тромбоцитов, лейкоцитов и факторов роста (тромбоцитарного фактора роста — PDGF, фактора роста фибробластов — FGF, фактора роста гепатоцитов — HGF).
    • Недавние усилия были сосредоточены на оптимизации методов доставки, которые позволяют тромбоцитам медленно дегранулировать свои биологические составляющие, что может способствовать заживлению и улучшать симптомы остеоартроза в течение более длительного периода времени.
    • Существуют различные факторы, которые влияют на прогрессирование остеоартроза в суставах, в том числе ингибирование воспалительных цитокинов и изменение уровня ферментативной экспрессии.
    • PRP-терапия направлена на опосредование воспалительных и катаболических факторов в дегенеративной среде посредством секреции противовоспалительных факторов и хемотаксических эффектов, а также на увеличение синтеза коллагена II типа и коркового белка аггрекана.
    • Растет число исследований, которые продемонстрировали клиническую пользу PRP для неоперативного лечения остеоартроза.
    • Необходимы дополнительные рандомизированные контролируемые исследования с долгосрочным наблюдением, чтобы подтвердить терапевтическую эффективность PRP в этих условиях.
    • Кроме того, необходимы дальнейшие фундаментальные исследования, а также тщательно разработанные доклинические исследования и стандарты отчетности, чтобы прояснить эффективность PRP для восстановления и регенерации хряща для будущих клинических применений.

    Терапия стромально-васкулярной фракцией (SVF)

    • SVF-терапия (от англ. Stromal Vascular Fraction) — это лечение клетками стромально-васкулярной фракции (СВФ), полученными из собственной (аутологичной) жировой ткани.
    • SVF-клетки вводят внутрисуставно под местной анестезией.
    • Цель СВФ лечения снять боль в суставе и восстановить суставной хрящ.
    • Клинические наблюдения применения данного варианта стимуляции регенерации гиалинового хряща демонстрируют высокую эффективность у больных с деформирующим остеоарторозом 11-111 стадии (Шевела Е.Ю. и соавт., 2017).

    Использование факторов роста

    • Результат доклинических испытаний ВМР-2: двойная доставка IGF-1 и ВМР-2 имела более высокую долю восстановления субхондральной кости, больший рост кости на краях дефекта и более низкую удельную поверхность кости, чем однократная доставка IGF-1.
    • Результат доклинических испытаний ВМР-7: контролируемая добавка ВМР-7 может улучшить хондрогенный эффект TGF-рЗ, и каркасы, загруженные этой комбинацией факторов роста, могут индуцировать образование хряща в культурах человеческих мезенхимальных стволовых клеток.
    • Результат клинических испытаний FGF-18 (сприфермин): qMRI показал увеличение толщины хряща дозозависимым образом у пациентов с остеоартрозом коленного сустава с приемлемым профилем безопасности через 3 года.

    Удаление соседних стареющих клеток (сенесцентных)

    • Недавнее исследование, проведенное Jeon и коллегами, показало, что стареющие хондроциты накапливаются вокруг травматических повреждений хряща и связаны с развитием артрита.
    • Клиренс этих стареющих клеток посредством внутрисуставной инъекции сенолитической молекулы ослаблял развитие артрита на мышиной модели.
    • Другое недавнее исследование показало, что омоложение старых MSCs с SRT1720, активатором SIRT1, значительно улучшало функцию сердца и ангиогенез в модели Ml у крыс по сравнению с контрольными MSC.
    • Эти потенциальные терапевтические средства, направленные на омоложение, оптимизацию и рекрутирование эндогенных стволовых клеток, вероятно, повысят эффективность методов инженерии хрящевой ткани у пожилых пациентов.

    Применение остеопластических материалов

    Использованная литература

    1. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С.Северина. – 4-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. – 784 с.:ил.

    2. Harpers Illustrated Biochemistry 30th Edition: 9780071825344: Medicine & Health Science Books.

    3. Биологическая химия: учебник В.К. Кухта, Т.Е. Морозкина, З.И. Олецкий, А.Д. Таганович; под ред. А.Д. Тагановича. Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ, 2008. – 688 с.

    4. Основы биохимии Ленинджера: в 3 т. / Д.Нельсон, М.Кокс; пер. с англ. — 3-е изд., испр. – М.: Лаборатория знаний, 2017.

    • Свежие записи
      • Балкон в многоквартирном доме: является ли он общедомовым имуществом?
      • Штраф за остекление балкона в 2022: что это и как избежать наказания
      • Штраф за мусор с балкона: сколько заплатить за выбрасывание окурков
      • Оформление балконного окна: выбираем шторы из органзы
      • Как выбрать идеальные шторы для маленькой кухни с балконом
      • Правообладателям
      • Политика конфиденциальности

      Мастерица © 2023
      Информация, опубликованная на сайте, носит исключительно ознакомительный характер