Прижизненное исследование тканей это

Этот раздел методов изучения нервной системы точнее было бы назвать: «Морфологическая физиология живой нервной системы». Действительно, прижизненные микроскопические исследования находятся на грани морфологии и физиологии. Жизнь невозможна без движений и превращений. Все остальные, предлагаемые вашему вниманию на нашем сайте методики, базируются на выявлении и контрастировании геометрии и химии уже зафиксированных тканей на статических гистологических препаратах. Прижизненная же нейроморфология основывается на кинетике морфологических процессов, прямом, во времени, изучении материальной жизни клеток и тканей. В этом состоит принципиальное отличие представляемых в этом разделе методик.

Морфология каждой конкретной живой нервной клетки не представляет собой что-то постоянное. Живой нейрон не только в культуре, но и в живом организме может при определенных условиях менять свою форму, образовывать отростки и втягивать их, менять их форму, длину и характер ветвления, изменять контакты с другими клетками, образовывать новые синапсы, перемещаться путем передвижения содержащей ядро части (своего тела) внутри одного из своих отростков с последующем втягиванием отростка в тело, расположенное уже в другом месте (см. пример – Эмбриогенез позвоночных в разделе Онтогенез) и т.д. Рецепторные клетки способны в ходе своей жизнедеятельности постоянно обновлять свой рецепторный аппарат – терминальные участки своих чувствительных отростков, формировать разрушающиеся в ходе функционирования цилиарные структуры (реснички, жгутики) и микроворсинки. Особенно все эти процессы выражены при формировании нервной системы в ходе онтогенеза организма и в случае различных повреждений при репарации, включая функциональную репарацию. Способность нейронов менять свою форму напрямую связана с удивительной текучестью нейроплазмы и постоянным движением аксоплазмы, которое одновременно идет и к телу и от тела клетки по ее отросткам. Наблюдение за током аксоплазмы легко осуществляется при изучении сокращения аксонов, лишенных оболочек. Нейроплазма перемещается в составе растущего и ретрагирующего отростка как единое целое.

Первые прижизненные нейроморфологические оптические исследования были проведены первым микроскопистом Антони ван Левенгуком (A. Leeuwenhoek. Odservations in nervos. Opera omnia. 1719, v.4, p. 348–360).

Самым распространенным и удобным прижизненным способом микроскопии по праву считается метод фазово-контрастной микроскопии, предложенной нобелевским лауреатом, физиком Фрицем Цернике в 1933 г. на физиологическом медицинском конгрессе в г. Вагенингене. Фазово-контрастный микроскоп значительно повышает контрастность объектов, проницаемых для света. С помощью этого метода могут быть исследованы без предварительной обработки бесцветные, прозрачные объекты, детали, строение которых оптически мало различаются между собой. Для работы по методу фазового контраста нужно кроме обычного биологического микроскопа иметь еще специальные устройства: фазовые конденсор и объектив.

Существуют и другие, реже применяемые методы, основанные на различных физикооптических приемах контрастирования, например цветной интерференционный контраст (рис. 5, 6, 7). Для таких исследований необходим специальный интерференционный микроскоп.

Наиболее простым способом контрастирования и визуализации живых препаратов являются боковое освещение и методика Номарского. Они легко реализуются при всевозможных смещениях конденсора или фазового кольца. Более сложными являются: темнопольная микроскопия (ультрамикроскопия), допускающая нестандартное разрешение (по Аббе – 0.2 мкм) и позволяющая наблюдать мелкие элементы с диаметром до 0.1 нм (рис. 8).

Читайте также: Флок антикоготь ткань для мебели

Интерференционная микроскопия позволяет определять плотность вещества живого субстрата (в основном концентрацию белка). Используется также и аноптральная микроскопия. Работа аноптрального микроскопа основана на принципе так называемого амплитудного контраста. Метод аноптрального контраста является усовершенствованием метода фазового контраста. Преимуществом метода аноптральной микроскопии является большая разрешающая способность объективов и возможность выявления минимальных оптических разностей плотности в неокрашенных препаратах (рис. 9). Чем больше оптическая плотность объекта, тем светлее его изображение.

Для прижизненных исследований может быть использовано наконец и кратковременное прижизненное (не суправитальное, которое используется в нейрогистологии, см. раздел «нейрогистологические методы») окрашивание нервных структур красителем метиленовым синим (рис. 10). Этот краситель обладает низкой токсичностью и, проникая в живые нервные клетки, через некоторое время обесцвечивается за счет перевода его в бесцветную нетоксичную форму.

При всем многообразии способов наблюдения прижизненной динамики объектов все эти методы не могут быть применены для любого объекта. Их можно использовать только на прозрачных животных, органах или клетках, например, для изучения двигательных нервных терминалей безмиелиновых нервных волокон или некоторых рецепторных клеток, изолированных нейронов, на прозрачных личинках многих беспозвоночных и т.п. Для длительного прижизненного изучения элементов нервной системы наиболее удобны выделенные нервные сплетения моллюсков, диссоциированные гидроиды, нервные сплетения вегетативной нервной системы позвоночных животных и т.п. (рис. 11, 12, 13). Второй особенностью методов является необходимость использования подвижного временного регистрирующего прибора: типа цейтраферного киноаппарата или видеосъемки. Фото О.С. Сотникова

Достоинствами прижизненных методов является отсутствие необходимости подвергать объект перед исследованием токсической обработке фиксирующими растворами, применяемыми во всех других методах исследования тканей, чтобы избежать посмертных изменений в их структуре. Однако сама эта обработка, сопровождающаяся быстрым удалением воды из исследуемой ткани, приводит к значительным морфологическим изменения, особенно в нежных нервных структурах (рис. 14, 15).

Прижизненные исследования на изолированных элементах нервной системы и на живых организмах позволяют понять какие морфологические структуры отражают те или иные процессы, происходящие в нервной системе. Оказалось, что эти процессы носят универсальный для всех типов животных характер и сопровождаются сходством морфологических структур в онтогенезе и филогенезе (Сотников, 2008; Зайцева, 1998, 1999, 2000, 2004, 2016; Зайцева, Флячинская, 2010). Так например, лапковидная уплощенная структура на конце нервного отростка представляет собой конус роста отростка как у нейронов в культуре ткани, так и в живом организме разного уровня организации и систематического положения (рис. 16, 17).

Сходным образом у всех исследованных животных выглядит и колба ретракции на конце отростка, которая свидетельствует о наличие процесса втягивания нейроном своего отростка. Этот процесс всегда наблюдается при повреждении нервного волокна, как у беспозвоночных, так и у позвоночных животных. Оба процесса происходят также при формировании нервных сплетений. Движение клеточного материала по тонким отросткам всех нейронов сопровождается появлением вдоль отростков варикозных расширений. Нейроны и рецепторные клетки перемещаются путем передвижения своих тел по своим отросткам (рис. 18, 19, 20). В ходе эволюции у всех животных с помощью такого перемещения идет погружение рецепторных клеток под эпителий, а также формирование нервных сплетений и ядерных центров – ганглиев (Зайцева, 1998, 1999, 2000, 2004, 2016; Зайцева и др., 2007, 2009).

Читайте также: Ткань для мебели venus

Прижизненные патологоанатомические исследования

Биопсия с последующим гистологическим исследованием играет важную роль при выборе наиболее подходящей лечебной программы для больных, страдающих злокачественными новообразованиями, в гастроэнтерологии, оториноларингологии, гинекологии, урологии, онкогематологии, пульмонологии, нефрологии, а также абдоминальной и торакальной хирургии и многих других разделах современной медицины.

Отдел оснащен современным оборудованием для проведения гистологического, гистохимического и иммуногистохимического исследований, которые позволяют проводить морфологическую диагностику с использованием современных методик. Гистологическое заключение выдаётся в соответствии с последними гистологическими классификациями ВОЗ и медицинской номенклатурой принятой у нас в стране.

при заболеваниях желудка, пищевода, двенадцатиперстной кишки (гастробиоптаты) с использованием дополнительных гистохимических окрасок на Helicobacter pylori, кишечную метаплазию, слизь, амилоид, грибы;
при заболеваниях кишечника (колонобиоптаты) с использованием дополнительных гистохимических окрасок в диагностике опухолевых и опухолеподобных образований;
при заболеваниях печени (гепатобиоптаты с использованием дополнительных гистохимических окрасок;
при заболеваниях женских половых органов: пайпель-биоптаты эндометрия с использованием иммуногистохимического метода в дифференциальной диагностике хронического воспаления, соскобы цервикального канала и полости матки, инцизионные (прицельные) биопсии шейки матки, эксцизионые (круговые) биопсии шейки матки с использованием иммуногистохимического метода в дифференциальной диагностике HPV-инфекции и CIN;
абортивного материала при патологии беременности;
при заболеваниях молочных желез (трепан-биопсии и операционный материал при секторальных резекциях);
при заболеваниях предстательной железы — полифокальной биопсии с использованием иммуногистохимического метода в дифференциальной диагностике патологического процесса;
при заболеваниях кожи;
при системных и аутоиммунных заболеваниях исследование кожно-мышечного лоскута;
при лимфопролиферативных заболеваниях (трепанобиопсии, лимфатические узлы);
диагностика опухолей мочеполовой системы;
дифференциальная диагностика опухолей мягких тканей;
проводится «срочное» гистологическое исследование во время оперативного вмешательства;
исследование операционного материала любой локализации.
консультация гистологических препаратов из других медицинских организаций, а также изготовление гистологических препаратов из фиксированного материала. Консультация препаратов и полное гистологическое исследование с полноценным заключением о характере процесса возможно только при наличии соответствующей медицинской документации (выписки из истории болезни, протоколов эндоскопического исследования и пр.)

Прижизненное исследование тканей это

Методы исследования в гистологии включают приготовление гистологических препаратов и их изучение с помощью световых или электронных микроскопов. Гистологические препараты представляют собой мазки, отпечатки органов, пленочные препараты, тонкие срезы кусочков органов, окрашенные тем или иным красителем (исследуются также нативные — неокрашенные срезы), помещенные на предметное стекло, заключенные в бальзам и покрытые тонким покровным стеклом. Для изготовления гистологического препарата необходимо после взятия материала произвести его фиксацию в том или ином фиксаторе (формалине, спирте, а для электронной микроскопии — в глутаровом альдегиде и четырехокиси осмия). Делается это для предотвращения процессов аутолиза и сохранения структуры органа, близкой к прижизненной. Далее следуют этапы обезвоживания кусочка органа в спиртах возрастающей концентрации и в ксилоле с целью уплотнения тканей, что необходимо для изготовления тонких срезов. Для придания кусочку органа еще большей плотности и гомогенности, обеспечивающей высококачественную резку, проводят его заливку в органическую среду — парафин, целлоидин (для световой микроскопии) и органические смолы (эпон, аралдит, дуркупан) — для электронно-микроскопического исследования. Существуют также физические способы фиксации материала, наиболее распространенным из которых является быстрое замораживание кусочка органа с помощью жидко.го азота и других средств. Для резки замороженного материала используют специальные приборы — криостаты, или замораживающие микротомы. Толщина срезов, предназначенных для световой микроскопии, не должна превышать 4-5 мкм, для электронной — 50-60 нм (такие ультратонкие срезы изготавливают на специальном приборе ультратоме, используя стеклянные или алмазные ножи и автоматический режим резки). После получения срезов их помещают на предметные стекла, далее следуют этапы освобождения срезов от заливочной среды (при световой микроскопии) и окраски для придания срезам контрастности. Среди гистологических красителей наиболее часто употребляется сочетание гематоксилина, маркирующего ядро (кислотные молекулы), и эозина, избирательно окрашивающего белковые молекулы (цитоплазматический краситель). По окончании окрашивания срезы заключают в консервирующие среды (канадский, кедровый бальзамы) и накрываются покровным стеклом. Основным методом гистологического исследования клеток, тканей и органов является световая микроскопия. В световом микроскопе для освещения объекта используются лучи видимого спектра. Современные световые микроскопы позволяют получать разрешение порядка 0,2 мкм (разрешающая способность микроскопа — это то наименьшее расстояние, при котором две рядом расположенные точки видны как отдельные). Разновидности световой микроскопии — фазово-контрастная, интерференционная, поляризационная, темнопольная и др. Фазово-контрастная микроскопия — метод изучения клеток в световом микроскопе, снабженном фазово-контрастным устройством. Благодаря смещению фаз световых волн в микроскопе такой конструкции повышается контрастность структур исследуемого объекта, что позволяет изучать живые клетки. Интерференционная микроскопия. В интерференционном микроскопе падающие на объект световые пучки раздваиваются — один пучок проходит через объект, другой — идет мимо. При последующем воссоединении пучков возникает интерференционное изображение объекта. По сдвигу фаз одного пучка относительно другого можно судить о концентрациях различных веществ в исследуемом объекте. Поляризационная микроскопия. В микроскопах этого типа световой пучок разлагается на два луча, поляризованных во взаимно перпендикулярных плоскостях. Проходя через структуры ткани со строгой ориентацией молекул, лучи запаздывают друг относительно друга вследствие неодинакового их преломления. Возникающий при этом сдвиг фаз является показателем двойного лучепреломления клеточных структур (таким способом были исследованы, например, миофибриллы). Источник

Свежие записи
- Балкон в многоквартирном доме: является ли он общедомовым имуществом?
- Штраф за остекление балкона в 2022: что это и как избежать наказания
- Штраф за мусор с балкона: сколько заплатить за выбрасывание окурков
- Оформление балконного окна: выбираем шторы из органзы
- Как выбрать идеальные шторы для маленькой кухни с балконом
- Правообладателям
- Политика конфиденциальности