Витальное окрашивание в микроскопии — окрашивание организмов или живых препаратов их тканей для повышения контраста при наблюдении под микроскопом. Прижизненная окраска позволяет наблюдать одновременно строение и функционирование организмов, клеток и тканей. [1]
Иногда витальным окрашиванием называют также введение красителя в живой организм, с дальнейшим его умерщвлением и приготовлением микропрепарата. [2]
Ряд методов витального окрашивания микроорганизмов разработан и применяется в микробиологии.
Красители для витального окрашивания
Красители для витального окрашивания должны обладать низкой токсичностью и способностью легко проникать в клетки живого окрашиваемого объекта. Используются красители для видимого света и флуоресцентные красители.
- Основные красители:
- Акридиновый оранжевый
- Метиленовый синий — используется для витального окрашивания простейших, изолированных клеток, культур тканей, тонких плёнок живых тканей. Используется раствор 1:1000 — 1:10 000. В ботанике используется для окраски вакуолей, накапливаясь в клетках, содержащих дубильные вещества. Может использоваться для окраски митохондрий. [1]
- Кислые красители:
- Индигокармин
- Кислый фуксин
- Калий-флуоресцин
- Эозин
- Нейтральные красители:
- Родамин B
См. также
Литература
- ↑ 12 Барыкина Р.П. и др. Справочник по ботанической микротехнике. Основы и методы. — М.: Изд-во МГУ, 2004 — 312 с. ISBN 5-211-06103-9
- ↑ Роскин Г.И. Микроскопическая техника — М.: Изд. «Советская наука» — 1946.
Wikimedia Foundation . 2010 .
Полезное
Смотреть что такое «Витальное окрашивание» в других словарях:
ВИТАЛЬНОЕ ОКРАШИВАНИЕ — окрашивание живых организмов, клеток или их частей в целях изучения … Словарь ботанических терминов
Витальное окрашивание — (от лат. vitalis жизненный, живой) гистофизиологический метод окрашивания живых растительных или животных клеток специальными красителями, при котором клетка не погибает; то же, что Прижизненное окрашивание … Большая советская энциклопедия
ОКРАШИВАНИЕ ВИТАЛЬНОЕ, ОКРАШИВАНИЕ ИНТРАВИТАЛЬНОЕ — (infravital staining) процесс окрашивания живой ткани путем введения красителя в организм. Для сравнения: Окрашивание суправитальное … Толковый словарь по медицине
окрашивание витальное — прижизненное окрашивание клеток микроорганизмов (обычно анилиновыми красителями) для изучения морфологии, подвижности. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии
Окрашивание Витальное (Vital Staining), Окрашивание Интравитальное (Infravital Staining) — процесс окрашивания живой ткани путем введения красителя в организм. Для сравнения: Окрашивание суправитальное. Источник: Медицинский словарь … Медицинские термины
Прижизненное окрашивание — витальное окрашивание, метод окрашивания живых клеток специальными красителями, применяемыми в нетоксических концентрациях. Такими красителями могут быть основные, например нейтральный красный и метиленовый синий (хромофорная группа… … Большая советская энциклопедия
ПРИЖИЗНЕННОЕ ОКРАШИВАНИЕ — см. витальное окрашивание … Словарь ботанических терминов
ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСНА — ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСНА,или прижизненная окраска, явление окрашивания тканей при жизни организма путем введения в него различных красящих веществ. Определение В. окраски как окраски живых тканей не совсем правильно, так как чрезвычайно трудно в ряде… … Большая медицинская энциклопедия
Хржонщевский, Никанор Адамович — (1836 1906) рус. физиолог и гистолог. В 1864 окончил Казан. ун т. Проф. Харьков. (с 1867) и Киев. (с 1869) ун тов. Работы посвящены изучению строения и физиология, функции легких, почек, печени, кровеносных и лимфатич. сосудов, функции кожи,… … Большая биографическая энциклопедия
лабораторная методика — ▲ практика ↑ эксперимент микроскопия. микроскоп. микрофотография. микротипия. препарат. препаратор. препарировать. шлиф. аншлиф. микротом. | гематоксилин. микрургия. | изотопные индикаторы, меченые атомы. витальное окрашивание. см. оптический… … Идеографический словарь русского языка
Прижизненное окрашивание
Большая советская энциклопедия. — М.: Советская энциклопедия . 1969—1978 .
Полезное
Смотреть что такое «Прижизненное окрашивание» в других словарях:
прижизненное окрашивание — Метод окрашивания живых клеток и тканей для микроскопического анализа; среди применяемых для П.о. красителей метиленовый синий, трипановый синий и др. [Арефьев В.А., Лисовенко Л.А. Англо русский толковый словарь генетических терминов 1995 407с.]… … Справочник технического переводчика
прижизненное окрашивание — vital staining прижизненное окрашивание. Mетод окрашивания живых клеток и тканей для микроскопического анализа; среди применяемых для П.о. красителей метиленовый синий, трипановый синий и др. (Источник: «Англо русский толковый … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.
ПРИЖИЗНЕННОЕ ОКРАШИВАНИЕ — см. витальное окрашивание … Словарь ботанических терминов
окрашивание витальное — прижизненное окрашивание клеток микроорганизмов (обычно анилиновыми красителями) для изучения морфологии, подвижности. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии
Витальное окрашивание — (от лат. vitalis жизненный, живой) гистофизиологический метод окрашивания живых растительных или животных клеток специальными красителями, при котором клетка не погибает; то же, что Прижизненное окрашивание … Большая советская энциклопедия
Лазерное излучение — (действие на вещество) Высокая мощность Л. и. в сочетании с высокой направленностью позволяет получать с помощью фокусировки световые потоки огромной интенсивности. Наибольшие мощности излучения получены с помощью твердотельных Лазеров на … Большая советская энциклопедия
Читайте также: Рождественские сувениры своими руками из ткани
Маркировка (биол.) — Маркировка (от нем. markieren ≈ отмечать, ставить знак) (биол.), мечение групп клеток, отдельных клеток или внутриклеточных структур для изучения их дальнейшей судьбы. М. применяется в исследованиях по биологии развития, главным образом в… … Большая советская энциклопедия
Микроскопическая техника — в биологии, совокупность методов и приёмов для изучения с помощью оптического и электронного микроскопов строения, жизнедеятельности, развития, химического состава и физических свойств клеток, тканей и органов. М. т. включает: подготовку… … Большая советская энциклопедия
Окраска микроорганизмов — один из широко применяемых методов микробиологической техники (См. Микробиологическая техника), заключающийся в окраске фиксированных клеток микроорганизмов специальными красителями. Вначале в каплю воды, находящуюся на предметном или… … Большая советская энциклопедия
Маркировка — I Маркировка (от нем. markieren отмечать, ставить знак) (биол.), мечение групп клеток, отдельных клеток или внутриклеточных структур для изучения их дальнейшей судьбы. М. применяется в исследованиях по биологии развития (См. Биология… … Большая советская энциклопедия
Витальное окрашивание
Большая советская энциклопедия. — М.: Советская энциклопедия . 1969—1978 .
Смотреть что такое «Витальное окрашивание» в других словарях:
Витальное окрашивание — в микроскопии окрашивание организмов или живых препаратов их тканей для повышения контраста при наблюдении под микроскопом. Прижизненная окраска позволяет наблюдать одновременно строение и функционирование организмов, клеток и тканей. [1]… … Википедия
ВИТАЛЬНОЕ ОКРАШИВАНИЕ — окрашивание живых организмов, клеток или их частей в целях изучения … Словарь ботанических терминов
ОКРАШИВАНИЕ ВИТАЛЬНОЕ, ОКРАШИВАНИЕ ИНТРАВИТАЛЬНОЕ — (infravital staining) процесс окрашивания живой ткани путем введения красителя в организм. Для сравнения: Окрашивание суправитальное … Толковый словарь по медицине
окрашивание витальное — прижизненное окрашивание клеток микроорганизмов (обычно анилиновыми красителями) для изучения морфологии, подвижности. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии
Окрашивание Витальное (Vital Staining), Окрашивание Интравитальное (Infravital Staining) — процесс окрашивания живой ткани путем введения красителя в организм. Для сравнения: Окрашивание суправитальное. Источник: Медицинский словарь … Медицинские термины
Прижизненное окрашивание — витальное окрашивание, метод окрашивания живых клеток специальными красителями, применяемыми в нетоксических концентрациях. Такими красителями могут быть основные, например нейтральный красный и метиленовый синий (хромофорная группа… … Большая советская энциклопедия
ПРИЖИЗНЕННОЕ ОКРАШИВАНИЕ — см. витальное окрашивание … Словарь ботанических терминов
ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСНА — ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСНА,или прижизненная окраска, явление окрашивания тканей при жизни организма путем введения в него различных красящих веществ. Определение В. окраски как окраски живых тканей не совсем правильно, так как чрезвычайно трудно в ряде… … Большая медицинская энциклопедия
Хржонщевский, Никанор Адамович — (1836 1906) рус. физиолог и гистолог. В 1864 окончил Казан. ун т. Проф. Харьков. (с 1867) и Киев. (с 1869) ун тов. Работы посвящены изучению строения и физиология, функции легких, почек, печени, кровеносных и лимфатич. сосудов, функции кожи,… … Большая биографическая энциклопедия
лабораторная методика — ▲ практика ↑ эксперимент микроскопия. микроскоп. микрофотография. микротипия. препарат. препаратор. препарировать. шлиф. аншлиф. микротом. | гематоксилин. микрургия. | изотопные индикаторы, меченые атомы. витальное окрашивание. см. оптический… … Идеографический словарь русского языка
ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСКА
ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСКА (лат. vitalis жизненный, живой) — прижизненная окраска животных или растительных клеток и тканей. С этой целью пользуются почти безвредными или малотоксичными красителями. Впервые витальное окрашивание произвел австрийский ученый Унгер (F. Unger, 1848), который ввел в белые лепестки гиацинта сок красных плодов Phytolacca. В гистофизиологии животных В. о. с помощью аммиачного кармина и индиго-сернокислого натрия впервые была применена русским ученым Н. А. Хржонщевским (1864, 1866) при исследовании функции почек и печени.
В. о. является одним из важных экспериментальных методов цито- и гистофизиологии. Иногда В. о. используется в клинике в качестве функциональной пробы при изучении физиологической полноценности почек (см. Хромоцистоскопия).
С помощью В. о. возможно: 1) изучение закономерностей поступления, накопления и выделения веществ, участвующих в метаболизме организма; 2) визуальное исследование некоторых физиол, процессов (секреции, экскреции); 3) маркировка определенных участков организма (органов, эмбриональных зачатков животных и растений, клеток или их органелл); 4) изучение физиол, состояния клетки в норме и при различных раздражающих и повреждающих воздействиях; 5) обнаружение в клетке определенных хим. веществ (нуклеиновых кислот, белков). Наиболее удобный объект для проведения В. о.— культуры клеток и тканей, однако В. о. успешно применяется и для кусочков органов и даже небольших животных и растений, целиком погружаемых в краситель. В. о. проводится также путем инъекции красителя в животную или растительную ткань. Распределение красителя в клетках и тканях обычно наблюдают под светооптическим микроскопом, а в тех случаях, когда для В. о. используют флюоресцирующие красители (флюорохромы),— с помощью люминесцентного микроскопа, что значительно повышает чувствительность исследования.
Читайте также: Украшение фона свадебного тканью
Для В. о. используют гл. обр. различные анилиновые красители, применяемые при гистол, методах исследования: кислотные (анионные), основные (катионные) и нейтральные (цветн. рис. 1—3). Водные растворы кислотных красителей плохо проникают в нормальную клетку. Поскольку проницаемость резко повышается при повреждающих воздействиях, эти красители (эозин) используют для выявления клеточного повреждения. Коллоидные растворы кислых красителей (трипановый синий, литиевый кармин и др.) проникают в клетку путем фагоцитоза и используются гл. обр. для изучения ретикулоэндотелиальной системы.
Основные красители, как правило, хорошо проникают в живую клетку. Их дальнейшее распределение в клетке зависит от ее состояния. В неповрежденной или мало поврежденной клетке основные красители аккумулируются в лизосомах в виде ясно выраженных цитоплазматических гранул, поэтому флюорохром акридиновый оранжевый широко используется для прижизненного выявления лизосом. При значительном повреждении клетки прекращается накопление красителей в лизосомах и появляется диффузная окраска ядра и цитоплазмы. Изменение окраски может носить обратимый характер — так наз. паранекроз (см.).
Особое место среди основных красителей занимает янус зеленый, обладающий способностью избирательно аккумулироваться в митохондриях; его широко используют для их прижизненного выявления.
Многие нейтральные или слабо-ионизированные основные красители и флюорохромы (фосфин 3R, бензпирен) обладают хорошей растворимостью в жирах и поэтому применяются для прижизненного выявления жировых включений.
Безвредность красителей, применяемых для В. о., относительна, они всегда влияют на те или иные клеточные процессы: янус зеленый блокирует дыхание, акридиновый оранжевый тормозит синтез белка; длительное воздействие нейтральным красным, акридиновым оранжевым, толуидиновым синим и т. п. приводит к агглютинации рибосом с образованием так наз. кринома — базофильной цитоплазматической структуры, возникающей в клетке под влиянием В. о.
Библиография: Граменицкий E. М. Прижизненная окраска клеток и тканей в норме и патологии, Л., 1963, библиогр.; Зеленин А. В. Взаимодействие амино-производных акридина с клеткой, М., 1971, библиогр.; Левин С. В. и Гольфанд К. А. Методика цитофотометрии витально окрашенных клеток, Цитология, т. 6, № 4, с. 525, 1964, библиогр.
Ю. И. Афанасьев, С. Я. Залкинд.
Витальное окрашивание тканей предполагает
Проблема, стоящая перед стоматологами, в повседневной практике, определить необходимость в профилактических вмешательствах или их комбинации с восстановительными мероприятиями, учитывая тяжесть клинических проявлений и активность кариозного процесса [6].
Научно доказано, что начальные кариозные поражения носят обратимый характер [6]. В этой связи, требуется раннее выявление кариеса и оценка риска его повторного возникновения (рецидива), с учетом возможностей минимально инвазивного лечения [7,10].
Точная диагностика кариеса эмали на ранних этапах представляет собой проблему, которую нелегко решить с помощью традиционно принятых методик [8]. Для нивелирования погрешностей в диагностике необходимо, как правило, комбинировать известные методы или их модифицировать [1].
Широкое распространение получил дополнительный метод диагностики начального кариеса с помощью окрашивания 1% водным раствором метиленового синего [3]. Этот метод не требует больших затрат времени, что позволяет широко использовать его в стоматологической практике. Однако, он недостаточно информативен для скрытых поверхностей. Отмечено, что некоторые красители обладают флуоресценцией, которая является одной из их характерных физических свойств и используется для диагностических целей в некоторых областях биологии и медицины. Это послужило основанием для предложения нового метода диагностики начального кариеса с помощью флуоресцентного контрастирования (подана заявка на патент) в комбинации с полимеризационной лампой (в качестве источника излучения), для усиления визуализации [2].
Существуют такие современные дополнительные методы диагностики кариеса как фиброоптическая трансиллюминация, количественная световая флуоресценция, лазерная флуоресценция. Наряду с удобством работы, и возможностью визуализации результата диагностики кариеса, полученные с их помощью данные не всегда можно точно интерпретировать для постановки топического диагноза. Так с помощью трансиллюминации сложно определить, чем вызвано образование теней: деминерализацией или дисминерализацией, что встречается при гипоплазии. Использование лазерно-флуоресцентного метода дает возможность получить объективные данные в случае поражения твердых тканей зуба в стадии D1 — D2 когда необратимые изменения имели место быть [4, 5]. Так как все они требуют наличия дорогостоящих приборов, это несколько ограничивает их применение в повседневной стоматологической практике, особенно в условиях бюджетной стоматологической поликлиники [9].
Цель исследования – провести сравнительную оценку эффективности методов диагностики начального кариеса с помощью витального окрашивания и флуоресцентного контрастирования.
Читайте также: Как называется тонкая шерстяная ткань
Материалы и методы
Исследование проводили на 5 свежеудаленных по ортодонтическим и пародонтологическим показаниям зубах (образцах). Для создания единообразных условий оценки методов на поверхности эмали зубов создавалась микропористость с помощью соляной кислоты одномолярной концентрации.
Микроскопирование проводили на растровом электронном микроскопе с автоэмиссионным катодом JEOL JSM-6700F (Tokyo Boeki, Япония).
Коронковую часть каждого из 5 образцов обрабатывали соляной кислотой с 2-х поверхностей. 1,2,3,4,5 образцы обработаны в течение 2,4,6,8,10 секунд соответственно, для создания микропористости различной степени выраженности (рис. 1, 2).
После протравливания каждый образец исследовали двумя методами диагностики.
Метод витального окрашивания осуществляли с помощью 1% водного раствора метиленового синего, наносимого на 1 мин, предварительно высушивали поверхность, после чего краситель смывали, диагностику проводили визуально по 10-бальной шкале синего цвета Л.А. Аксамит.
Методом флуоресцентного контрастирования осуществляли с помощью 1% водного раствора родамина С, предварительно высушивая поверхность. После экспозиции 1 мин. краситель смывали. Диагностику исследуемого участка проводили визуально при освещении стоматологической полимеризационной лампы через оранжевый светозащитный фильтр.
Регистрацию данных проводили с помощью цифровой фотокамеры «Nikon D 300» (Nikon, Япония).
Полученные результаты и обсуждение
Результаты электронной микроскопии представлены на рисунках 1 и 2.
Рис. 1. Микрофотография поверхности эмали образца № 1.
На рисунке 1 определяются участки растворения поверхностного гиперминерализованного слоя, протравливание соляной кислотой одномолярной концентрации проводилось 2 секунды.
Рис. 2. Микрофотография поверхности эмали образца № 5.
На рисунке 2 определяются значительно большее (по сравнению с 2-х сек. экспозицией) растворение поверхностного гиперминерализованного слоя и деструкция эмалевых призм, протравливание соляной кислотой одномолярной концентрации проводилось 10 секунд.
После микроскопирования каждый образец подвергли окрашиванию 1% водным раствором метиленового синего (рис. 3) и 1% водным раствором родамина С с другой (противоположной) исследуемой поверхности образца (рис. 4).
Рис. 3. Исследуемые образцы, окрашенные 1% водным раствором метиленового синего в порядке от 1 до 5 справа налево.
Рис. 4. Исследуемые образцы, окрашенные 1% водным раствором родамина С в порядке от 1 до 5 справа налево.
После усиления визуализации светом стоматологической полимеризационной лампы определяется свечение участка заданной деминерализации образца №1 от бело-желтого оттенка (при экспозиции травления 2 сек.) до красного оттенка выраженной интенсивности у образца № 5 (при экспозиции травления 10 сек.).
Рис. 5. Визуализация в свете стоматологической полимеризационной лампы после окрашивания 1% водным раствором родамина С. Образец № 1 — А, образец № 5 – Б.
Обсуждение полученных результатов
По результатам микроскопии определяется усиление микропористости в поверхностном гиперминерализованом слое в 1 и 2 образцах, полное отсутствие этого слоя в 3 образце, и усиление микропористости с последующей деструкцией эмалевых призм от 4 к 5 образцу. Определяется тенденция к увеличению микропористости последовательно от 1-го до 5- го образца (рис. 1, 2).
Из приведенного рисунка 4 видно, что определяется постепенное усиление интенсивности окрашивания 1% водным раствором родамина С от 1 к 5 образцу. На рисунке 3 отмечается усиление интенсивности окрашивания 1% водным раствором метиленового синего от 1 к 5 образцу, но не настолько последовательно и систематизировано, как при комбинированном использовании родамина С и света полимеризационной лампы.
Подобранная концентрация родамина С (1% водный раствор) после окрашивания образца №1 приводит к светло-желтой флуоресценции с свете стоматологической полимеризационной лампы (рис. 5-А). Отмечено, что свечение родамина С нанесенного на образец № 5 имеет красный оттенок (рис. 5-Б). Изменение цвета флуоресценции, вероятно, связанно с большим накоплением красителя в очаге деминерализации.
При проведении диагностики 5-ти образцов с различной степенью деминерализации поверхности эмали зубов методом окрашивания 1% водным раствором метиленового синего образец №1 (с 2-х сек. экспозицией травления р-ра HCl) окрасился незначительно, что говорит о сомнительной возможности данного метода для диагностики этапа ранней деминерализации. Диагностически значимая визуализация окрашивания определяется лишь в 5-ом образце (с 10-и сек. экспозицией травления р-ра HCl). При флуоресцентном контрастировании с применением 1% водного раствора Родамина С определяется последовательное нарастающее изменение свечения от 1 к 5 образцу, что говорит о большей чувствительности метода.
Рекомендуемая автором концентрация родамина С (1% водный раствор) дает возможность дифференцировать начальные изменения на поверхности твердых тканей зуба, в результате деминерализации, с деструкцией эмалевых призм и поверхностным кариесом, что в свою очередь может быть использовано для выбора тактики врача — профилактических или лечебных манипуляций.
Ломиашвили Л.М., д.м.н., доцент, заведующая кафедрой терапевтической стоматологии ГБОУ ВПО Омской государственной медицинской академии Минздрав России, г. Омск.
Петрова Т.Г., д.м.н., профессор, зав. Кафедрой терапевтической стоматологии ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава России, г.Новосибирск.
- Свежие записи
- Балкон в многоквартирном доме: является ли он общедомовым имуществом?
- Штраф за остекление балкона в 2022: что это и как избежать наказания
- Штраф за мусор с балкона: сколько заплатить за выбрасывание окурков
- Оформление балконного окна: выбираем шторы из органзы
- Как выбрать идеальные шторы для маленькой кухни с балконом