Термин «липиды» собирательный. Им обозначают все жироподобные вещества, экстрагируемые растворителями жиров (бензин, эфир, хлороформ и др.).
В основе методов окрашивания лежат чисто физические процессы. Суть их заключается в том, что вещества, красящие жиры, хорошо в них растворяются и поэтому легко переходят из раствора в липиды.
Является наиболее распространенным методом выявления жира.
Приготовление раствора красителя.
В 100 мл горячего 70% спирта засыпают 0,2—0,3 г порошка судана III, несколько раз взбалтывают и ставят в термостат (при58°С) на несколько часов, затем охлаждают и фильтруют.
1. Замороженные срезы (из свежей или фиксированной в формалине ткани) на несколько минут переносят из воды в 50% спирт.
2. Помещают в спиртовой раствор красителя на 15—30 мин (бюксы следует закрывать, так как испарение спирта приводит к выпадению осадков красителя).
3. Быстро ополаскивают в 50% спирте.
4. Промывают в дистиллированной воде.
5. Подкрашивают ядра кислым гемалауном.
6. Промывают и заключают в желатин или глицерин-желатин (обезвоживание в спиртах
Жировые вещества интенсивно оранжевого цвета, ядра —»синие. Препараты выцветают сравнительно скоро, поэтому откладывать исследование не рекомендуется.
в смесь из 50мл ацетона и 50 мл 70% спирта засыпают 0,2—0,3 г шарлаха. Хорошо закрывают и взбалтывают. Полученный раствор перед употреблением фильтруют.
1. Замороженные срезы из свежей или фиксированной в формалине ткани помещают в 50% спирт на 2—4 мин.
2. Окрашивают в растворе красителя 2—3 мин.
3. Быстро ополаскивают в 70% спирте.
5. Подкрашивают ядра кислым гемалауном.
6. Промывают в воде и заключают в глицерин или глицерин-желатин.
Жировые вещества оранжево-красные, ядра—синие.
ЖИРОВАЯ ТКАНЬ
ЖИРОВАЯ ТКАНЬ (textus adiposus) — разновидность соединительной ткани. Состоит из липоцитов (жировых клеток), каждый из которых содержит каплю жира. Цитоплазма скудная, мелкозернистая, имеет вид узкого ободка; ядро располагается на периферии клетки. Между липоцитами располагаются коллагеновые, ретикулярные и эластичные волокна, кровеносные капилляры, нервные волокна, гистиоциты, фибробласты, лимфоидные элементы, лаброциты (тучные клетки). В одних местах рыхлой неоформленной соединительной ткани липоциты могут располагаться поодиночке среди других клеток’ и межклеточного вещества, в других — образуют большей или меньшей величины скопления или целые дольки. Жировая капля липоцита состоит из нейтрального жира с примесью жирных к-т и холестерина. В жире содержатся пигменты — липохромы, придающие ему желтоватую окраску. В Ж. т. обнаруживается нек-рое количество гликогена.
Ж. т. развивается из скоплений мезенхимных клеток. К 3-му мес. внутриутробной жизни в цитоплазме появляются мелкие жировые капельки (цветн. рис. 7 и 8), которые, быстро сливаясь, образуют одну каплю, оттесняющую ядро к периферии. При электронно-микроскопическом изучении липоцитов установлено почти полное отсутствие в них гранулярного цитоплазматического ретикулума и слабое развитие пластинчатого комплекса (комплекса Гольджи). Это связано с функциональной специализацией липоцитов, которые накапливают липидные включения и почти совсем не синтезируют белки. В Ж. т. не только накапливаются, но и вырабатываются жировые вещества, происходит синтез жиров из углеводов, а также расщепление жировых веществ с освобождением углеводов. На высокую обменную активность Ж. т. указывает большое количество содержащихся в ней дегидрогеназ, дегидрирующих жирные к-ты (см. Жировой обмен).
Накопление и мобилизация липидов в Ж. т., непосредственно связанные с обменом веществ в организме, возможны при богатой васкуляризации жировой ткани, когда каждый липоцит находится в непосредственной или близкой связи с кровеносными капиллярами. Последние являются конечными отделами входящей в каждую жировую дольку артерии.
Известна способность Ж. т. заполнять в организме пространства, образовавшиеся вследствие убыли другой ткани (вакатное ожирение). Ж. т. участвует в водном обмене. Высвобождение воды при расходовании жира имеет значение при голодании и активной физ. работе, сопровождающейся усиленным потоотделением. Ограничение поступления воды ведет к уменьшению отложения жира. Ж. т., являясь плохим проводником тепла, играет роль тепло-изолятора.
В некоторых областях тела, в частности на подошвах стоп, между внутренними органами, Ж. т., находясь во взаимоотношении с фиброзной соединительной тканью, выступает как амортизирующая структура, предохраняющая органы от механических воздействий.
У взрослого человека среднего веса с нормальным обменом веществ общее количество Ж. т. достигает 6—10 кг. Объем Ж. т. в зависимости от уровня обменных процессов изменяется; подобные колебания совершаются в значительных пределах, что не свойственно другим тканям организма. Эти изменения связаны с резким изменением количественного содержания различных включений в клетке и разрастанием Ж. т. При резко выраженном истощении организма липоциты во многих участках тела полностью исчезают. При этом Ж. т. принимает строение исходной рыхлой неоформленной волокнистой соединительной ткани.
Топография отложений Ж. т. в организме в обычных условиях жизнедеятельности имеет нек-рую закономерность. Значительная часть ее представлена подкожным жировым слоем. Остальная часть находится в составе серозных оболочек, гл. обр. в большом и малом сальнике, между органами грудной и брюшной полостей, а также по ходу кровеносных сосудов и нервов.
Для выявления жировых включений на гистол, препаратах имеются специальные методы окраски: четырехокисью осмия, шарлахом красным, суданом-III и др.
Помимо обычной — так наз. белой Ж. т., существует бурая Ж. т. Она встречается в значительном количестве у животных, впадающих в зимнюю спячку. Особенностью бурой Ж. т. является то, что при голодании организма она теряет жировые включения позднее обычной Ж. т. У человека бурую Ж. т. обнаруживают в эмбриональном периоде, после рождения она превращается в обычную Ж. т., иногда сохраняясь в виде рудиментарных образований. Ткань богато васкуляризирована. Помимо нейтральных жиров, в бурой Ж. т. много жирных к-т, холестерина и фосфолипидов. Считают, что бурая Ж. т. является депо сложных жиров и витаминов, имеются сведения о связи бурой Ж. т. с надпочечниками, а также о ее роли как терморегулятора у новорожденных (см. Жировой обмен).
Патология
Избыточное развитие Ж. т. может быть как общим (ожирение), так и местным (липоматозы). Причиной ожирения могут быть экзогенные факторы — обильное питание с большим количеством углеводов, систематическое употребление алкоголя. Эндогенные формы ожирения связаны с различными гормональными нарушениями (см. Ожирение). Для липоматоза (см.) характерно очаговое избыточное развитие Ж. т. в виде липом, иногда множественных. Проявлением липоматоза является болезнь Деркума — развитие в подкожной клетчатке по ходу нервных стволов болезненных узлов или диффузных разрастаний, имеющих строение липомы (см. Деркума болезнь).
Уменьшение Ж. т. в объеме отмечается при голодании, некоторых хрон, заболеваниях, злокачественных опухолях, регионарных липодистрофиях, напр, при прогрессирующей липодистрофии (болезнь Барракера— Симонса).
Специфические воспалительные процессы в Ж. т. протекают так же, как и в других тканях. Неспецифические воспаления имеют ряд характерных особенностей. Напр., гнойное воспаление в Ж. т. отличается бурным течением и гнойным расплавлением (см. Флегмона). При хрон, воспалениях и некрозах различного происхождения в Ж. т. (см. Жировые некрозы) развиваются панникулиты (см.) и липогранулемы (см.), иногда с обызвествлением.
Ж. т. может быть источником доброкачественных (липомы, фибролипомы) и злокачественных (липосаркомы) опухолей. Бурая Ж. т. также может быть источником доброкачественных и злокачественных опухолей — гиберном (см.).
Библиография: Де Робертис Э., Новинский В. и Саэс Ф. Биология клетки, пер. с англ., М., 1973; 3 а в а р-з и н А. А. Избранные труды, т. 4, М.—Л., 1953; И о с т X. Физиология клетки, пер. с англ., М., 1975; Ньюсхолм Э. и Старт К. Регуляция метаболизма, пер. с англ., М., 1 977; Поликар А. и Бо Ш. А. Субмикроскопические структуры клеток и тканей в норме и патологии, пер. с франц., Л., 1962; Maximow А. Bindegewebe und blutbildente Gewebe, Handb, mikroskop. Anat. d. Menschen, hrsg. v. W. Mollendorff, Bd 2, T. 1, S. 232, B., 1927.
Гистохимическое выявление липидов суданом III и шарлахом
Термин «липиды» охватывает жиры (т.е. триглицериды) и жироподобные вещества растительного и животного происхождения. Это преимущественно неполярные соединения, основным компонентом которых являются жирные кислоты. Липиды нерастворимы или плохо растворимы в воде, но хорошо растворяются в типичных жирорастворителях: бензине, хлороформе, четыреххлористом углероде, ацетоне, эфире, петролейном эфире, горячем спирте и т.п. Не все липиды растворимы в указанных растворителях одинаково, на этом основаны дифференциальная экстракция липидов и выявление их с помощью жирорастворимых красителей.
С учетом гистохимических свойств и химической структуры липиды делят на простые (нейтральные жиры, воски, стериды) и сложные (фосфолипиды, цереброзиды, ганглиозиды, сульфолипиды). Гистохимическая идентификация липидов
Гистохимическое выявление липидов возможно с помощью физических и химических методов. К физическим относятся методы экстракции, поляризационная микроскопия и окрашивание жирорастворимыми красителями, к химическим — подавляющее большинство гистохимических методов выявления липидов, направленных главным образом на определение активных функциональных групп.
В основе методов экстракции липидов лежат законы растворимости, известные из аналитической органической химии. Их необходимо также учитывать при подготовке тканей для проведения гистохимического анализа липидов. Первые потери водорастворимых липидов происходят уже при фиксации в альдегидах или тетраоксиде осмия и продолжаются в процессе обезвоживания и заливки. После первичной фиксации в тетраоксиде осмия вымываются главным образом насыщенные липиды. Особенно велики суммарные потери липидов в тканях, фиксированных в альдегидах. После двойной фиксации в альдегидах и тетраоксиде осмия достигается хорошая стабилизация структур, содержащих ненасыщенные липиды. Наибольшие потери липидов наблюдаются во время пропитки ткани парафином и эпоксидными смолами, но их можно уменьшить путем более быстрого обезвоживания и замены этанола на ацетон. Стабилизация липидов может быть значительно усилена путем добавления к альдегидной фиксирующей смеси хлорида кальция, как, например, в кальций-формоле по Бейкеру или при использовании хроматов, способных окислять ненасыщенные липиды, как в фиксаторе Элфтмана, содержащем бихромат калия и сулему. Хорошо сохраняются фосфолипиды при фиксации с одновременным обезвоживанием в ацетоне с 0,65 % хлоридом магния.
Управляя процессом экстрагирования липидов и применяя его в сочетании с методами окрашивания, гистохимия обеспечивает контроль специфичности окрашивания и дифференцированно выявляет различные липидные фракции.
После экстракции кусочки ткани промывают водой, и криостатные срезы окрашивают раствором судана черного В в 70 % спирте. Следует помнить, что при использовании этого метода не удается полностью исключить диффузию, что затрудняет точную локализацию липидов, однако все же они остаются в срезе и окрашиваются Суданом.
Разработаны приемы липидной экстракции, обеспечивающие хорошую ультраструктурную сохранность ткани для целей электронно-микроскопической гистохимии.
Для выявления нейтрального жира пользуются суданом III, окрашивающим жир в оранжевый цвет. Наиболее часто применяют окраску суданом III и красным шарлахом. Указанные красители выявляют все жиры и липоиды, нейтральные жиры интенсивно окрашиваются в оранжево-красный цвет. Для выявления жиров требуется формалиновая фиксация; фиксировать нужно не более 48 часов. После промывки кусочки режут на замораживающем микротоме. Обычные методы заливки применять нельзя, так как эфир, ксилол и крепкие спирты, употребляемые при заливке, растворяют и извлекают жиры из изучаемых объектов.
Метод окраски суданом III и красным шарлахом основан на том, что эти краски хорошо растворяются в жирах. Из насыщенных спиртовых растворов судан III и шарлах красный легко переходят в жир окрашиваемых тканей. Растворимость судана III и шарлаха красного в жирах гораздо выше, чем в спирте.
Окрашивание суданом III является наиболее распространенным методом выявления жира.
Приготовление раствора красителя. В 100 мл горячего 70% спирта засыпают 0,2-0,3 г порошка судана III, несколько раз взбалтывают и ставят в термостат (при 58°С) на несколько часов, затем охлаждают и фильтруют.
1. Замороженные срезы (из свежей или фиксированной в формалине ткани) на несколько минут переносят из воды в 50% спирт.
2. Помещают в спиртовой раствор красителя на 15-30 мин (при применении щелочного раствора судана III — на 5 минут).
3. Быстро ополаскивают в 50% спирте.
4. Промывают в дистиллированной воде.
5. Подкрашивают ядра кислым гемалауном или гематоксилином Эрлиха.
6. Промывают и заключают в желатин или глицерин-желатин
Результат: жировые вещества интенсивно оранжево-красного цвета, ядра — синие.
Окраску срезов раствором судана III следует проводить в бюксе с закрытой крышкой. В противном случае спирт испаряется, и из насыщенного раствора судан III выпадает в виде осадка, который остается в препарате.
Шарлах красный для окраски жира употребляют точно в той же прописи и вполне аналогичным способом, что и судан III.
Красители: в смесь из 50 мл ацетона и 50 мл 70% спирта засыпают 0,2-0,3 г шарлаха. Хорошо закрывают и взбалтывают. Полученный раствор перед употреблением фильтруют.
1. Замороженные срезы из свежей или фиксированной в формалине ткани помещают в 50% спирт на 2-4 мин.
2. Окрашивают в растворе красителя 2-3 мин.
3. Быстро ополаскивают в 70% спирте.
5. Подкрашивают ядра кислым гемалауном или гематоксилином Эрлиха.
6. Промывают в воде и заключают в глицерин или глицерин-желатин.
Результат. Жировые вещества оранжево-красные, ядра — синие.
Окраска жира Суданом III и шарлахом красным довольно быстро выцветает, поэтому желательно исследовать препараты вскоре после их изготовления. Окрашенные на жир срезы нельзя обезвоживать и заключать обычным способом: это вызвало бы растворение и извлечение жира из препарата (ксилол, в котором растворяют бальзам, растворит и жиры). Учитывая сказанное, срезы после окраски на жир заключают в глицерин или глицерин-желатин, которые не растворяют жира и хорошо просветляют необезвоженный препарат. Жидкий глицерин не дает возможности фиксировать покровное стекло над препаратом. Для укрепления покровного стекла его по краям покрывают валиком из расплавленного парафина, а лучше из менделеевской замазки. Чтобы добиться хорошего прикрепления покровного стекла, надо, заключая препарат, наносить на него такое количество глицерина, которое не достигало бы краев покровного стекла. После заключения в глицерин-желатин при длительном хранении препаратов наблюдается выпадение судана III в виде красных кристаллов.
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет